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DNA連接酶和DNA聚合酶

DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎?為什么?

              (來(lái)源http://202.96.165.188/liuyue/?p=474

答:不 是一回事?;蚬こ讨兴玫倪B接酶有兩種:一種是從大腸桿菌中分離得到的,稱(chēng)之為E·coli連接酶。另一種是從T4噬菌體中分離得到,稱(chēng)為T(mén)4連接酶。 這兩種連接酶催化反應基本相同,都是連接雙鏈DNA的缺口(nick),而不能連接單鏈DNA。DNA連接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯鍵(在相鄰核 苷酸的3位碳原子上的羥基與5位碳原子上所連磷酸基團的羥基之間形成),那么,二者的差別主要表現在什么地方呢?

(1)DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羥基上,形成磷酸二酯鍵;而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,不是在單個(gè)核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。

(2)DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板,將單個(gè)核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈;而DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來(lái)。因此DNA連接酶不需要模板。

此外,二者雖然都是由蛋白質(zhì)構成的酶,但組成和性質(zhì)各不相同。

DNA連接酶連接的是什么部位?

DNA連接酶是將一段DNA片段3′端的羥基與另一DNA片段5′端磷酸基團上的羥基連接起來(lái)形成酯鍵,而不是連接互補堿基之間的氫鍵。

DNA限制酶作用于磷酸二酯鍵
       DNA連接酶作用于磷酸二酯鍵
       DNA聚合酶作用于磷酸二酯鍵
       DNA解旋酶作用于氫鍵

限 制性核酸內切酶(以下簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶):限制酶主要存在于微生物(細菌、霉菌等)中。一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并且能在特定的切點(diǎn)上切割 DNA分子。是特異性地切斷DNA鏈中磷酸二酯鍵的核酸酶(“分子手術(shù)刀”)。發(fā)現于原核生物體內,現已分離出100多種,幾乎所有的原核生物都含有這種 酶。是重組DNA技術(shù)和基因診斷中重要的一類(lèi)工具酶。例如,從大腸桿菌中發(fā)現的一種限制酶只能識別GAATTC序列,并在G和A之間將這段序列切開(kāi)。目前 已經(jīng)發(fā)現了200多種限制酶,它們的切點(diǎn)各不相同。蘇云金芽孢桿菌中的抗蟲(chóng)基因,就能被某種限制酶切割下來(lái)。在基因工程中起作用。
DNA連接酶:主要是連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵,起連接作用,在基因工程中起作用。
DNA聚合酶:主要是連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵,在DNA復制中起做用。DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羥基上,形成磷酸二酯鍵;而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,不是在單個(gè)核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。
      DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板,將單個(gè)核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈;而DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來(lái)。因此DNA連接酶不需要模板。
      RNA聚合酶(又稱(chēng)RNA復制酶、RNA合成酶)的催化活性:RNA聚合酶以完整的雙鏈DNA為模板,轉錄時(shí)DNA的雙鏈結構部分解開(kāi),轉錄后DNA仍 然保持雙鏈的結構。真核生物RNA聚合酶:真核生物的轉錄機制要復雜得多,有三種細胞核內的RNA聚合酶:RNA聚合酶I轉錄rRNA,RNA聚合酶II 轉錄mRNA,RNA聚合酶III轉錄tRNA和其它小分子RNA。在RNA復制和轉錄中起作用。
      反轉錄酶:RNA指導的DNA聚合酶,具有三種酶活性,即RNA指導的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指導的DNA聚合酶。在分子生物學(xué)技術(shù)中,作為重要的工具酶被廣泛用于建立基因文庫、獲得目的基因等工作。在基因工程中起作用。
      解旋酶:是一類(lèi)解開(kāi)氫鍵的酶,由水解ATP來(lái)供給能量它們常常依賴(lài)于單鏈的存在,并能識別復制叉的單鏈結構。在細菌中類(lèi)似的解旋酶很多,都具有ATP酶 的活性。大部分的移動(dòng)方向是5′→3′,但也有3′→5′移到的情況,如n’蛋白在φχ174以正鏈為模板合成復制形的過(guò)程中,就是按3′→5′移動(dòng)。在 DNA復制中起做用。

 

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