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色譜分析中出現鬼峰腫么辦?


實(shí)驗與分析


鬼峰產(chǎn)生的原因是多種多樣的,根據本人的經(jīng)驗以及文獻報道,將原因歸納為以下幾個(gè)方面:
1、流動(dòng)相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì),當梯度開(kāi)始時(shí)由于有機相比例不高,洗脫能力不強,雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集,隨著(zhù)流動(dòng)相比例變化,洗脫能力增強,富集的雜質(zhì)被洗脫,從而形成鬼峰。
2、流動(dòng)相脫氣不完全??諝庠谟袡C相和水中的溶解度不同,當水和有機相混合時(shí),氣泡就產(chǎn)生了
3、操作問(wèn)題
情況梳理
1、試劑問(wèn)題

a) 有機溶劑

甲醇制備工藝相對乙腈來(lái)說(shuō)較為簡(jiǎn)單,雜質(zhì)含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣,所以當使用紫外檢測器時(shí),尤其是波長(cháng)較低時(shí),盡量使用乙腈作為有機相,用甲醇的話(huà)漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量要求較高,一般用進(jìn)口梯度色譜專(zhuān)用乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現。

b) 水

很多單位用自制蒸餾水作為水相,但是結果并不是很好。原因就是一些低沸點(diǎn)的有機雜質(zhì)并不能夠通過(guò)蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水,沒(méi)有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替,但是如果色譜條件比較嚴格也是有可能出問(wèn)題的。

c) 其它試劑

緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會(huì )對流動(dòng)相造成很大的影響,盡量用純度高的試劑配制流動(dòng)相。

2、儀器問(wèn)題

a) 液相的流動(dòng)相管路被污染。

長(cháng)時(shí)間的使用含水量較高的流動(dòng)相(尤其是加入緩沖鹽的),細菌就容易在管路中滋生,細菌的代謝產(chǎn)物或是細胞碎片能造成鬼峰。

b) 輸送泵故障,造成系統壓力不穩,從而產(chǎn)生鬼峰。

c) 單向閥堵塞,造成系統壓力不穩,從而產(chǎn)生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動(dòng)相,現在應該已經(jīng)得到改進(jìn)。

情況梳理
1、 在線(xiàn)脫氣機脫氣不完全。

2、 兩種流動(dòng)相的有機相比例相差太大。例如A為100%水,B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動(dòng)相之間的差距,降低空氣在兩中流動(dòng)相中溶解度的差異,從而減少氣泡的產(chǎn)生。

3、 流動(dòng)相配置好后預先超聲脫氣。

情況梳理

1、流動(dòng)相配置過(guò)程中受到污染


a) 盛放流動(dòng)相的容器或是量具受到污染。

這種污染可能來(lái)自于洗滌劑、鉻酸洗液或是其他實(shí)驗人員用完后的殘留雜質(zhì)。流動(dòng)相容器的清洗一般用干凈的水+有機溶劑涮洗就行,過(guò)多的清洗步驟反而可能造成二次污染。有時(shí)流動(dòng)相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來(lái)源。


b) pH計。

很多pH計以聚碳酸酯作為外殼,然而聚碳酸酯是可以溶于有機溶劑的,所以盡量使用玻璃pH計來(lái)測量流動(dòng)相的pH。


c) 濾膜。

劣質(zhì)的或者型號錯誤的濾膜往往是鬼峰出現的原因。


d) 放置時(shí)間過(guò)長(cháng)。

流動(dòng)相在空氣中暴露時(shí)間過(guò)長(cháng),就可能吸收空氣中的有機雜質(zhì),有時(shí)流動(dòng)相中的添加劑,例如TFA,時(shí)間長(cháng)了會(huì )氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。

2、儀器樣品稀釋液與流動(dòng)相極性或者pH相差太大。

這也是導致鬼峰的原因之一,這種問(wèn)題很有可能導致樣品分為兩個(gè)不同的階段出峰,從而產(chǎn)生雙峰或者多峰。

(文章來(lái)源:論壇)

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