口服或其他非脈管內給藥的制劑，其活性成分的吸收受多種因素的影響，包括制劑工藝、藥物粒徑、晶型或多晶型，處方中的賦形劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、包衣材料、溶劑、助懸劑等。生物利用度是保證藥品內在質(zhì)量的重要指標，而生物等效性則是保證含同一藥物的不同制劑質(zhì)量一致性的主要依據。生物利用度與生物等效性概念雖不完全相同，但試驗方法基本一致。為了控制藥品質(zhì)量，保證藥品的有效性和安全性，特制訂本指導原則。何種藥物制劑需要進(jìn)行生物等效性或生物利用度試驗，可根據有關(guān)部門(mén)頒布的法規要求進(jìn)行。
進(jìn)行藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗的臨床實(shí)驗室和分析實(shí)驗室，應提供機構名稱(chēng)以及醫學(xué)、科學(xué)或分析負責人的姓名、職稱(chēng)和簡(jiǎn)歷。
一、生物樣品分析方法的基本要求
生物樣品中藥物及其代謝產(chǎn)物定量分析方法的專(zhuān)屬性和靈敏度，是生物利用度和生物等效性試驗成功的關(guān)鍵。首選色譜法，如HPLC、GC以及GC-MS、LC-MS、LC-MS-MS聯(lián)用技術(shù)，一般應采用內標法定量。必要時(shí)也可采用生物學(xué)方法或生物化學(xué)方法。
由于生物樣品取樣量少、藥物濃度低、內源性物質(zhì)（如無(wú)機鹽、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、代謝物）及個(gè)體差異等多種因素影響生物樣品測定，所以必須根據待測物的結構、生物介質(zhì)和預期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品分析方法，并對方法進(jìn)行驗證。
1．專(zhuān)屬性
必須證明所測定的物質(zhì)是原形藥物或特定的活性代謝物，內源性物質(zhì)和相應的代謝物不得干擾樣品的測定。對于色譜法至少要提供空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對于復方制劑應特別加強專(zhuān)屬性研究，以排除可能的干擾。
2．標準曲線(xiàn)與線(xiàn)性范圍
根據所測定物質(zhì)的濃度與響應的相關(guān)性，用回歸分析方法獲得標準曲線(xiàn)。標準曲線(xiàn)高低濃度范圍為線(xiàn)性范圍，在線(xiàn)性范圍內濃度測定結果應達到試驗要求的精密度和準確度。
必須用至少6個(gè)濃度建立標準曲線(xiàn)，應使用與待測樣品相同的生物介質(zhì)，線(xiàn)性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將線(xiàn)性范圍外推求算未知樣品的濃度。標準曲線(xiàn)不包括零點(diǎn)。
3．精密度與準確度
要求選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準確度考察。低濃度選擇接近定量下限（LLOQ），在LLOQ的3倍以?xún)?；高濃度接近于標準曲線(xiàn)的上限；中間選一個(gè)濃度。每一濃度至少測定5個(gè)樣品。
精密度用質(zhì)控樣品的日內和日間相對標準差（RSD）表示，RSD一般應小于15%，在LLOQ附近RSD應小于20%.
準確度是指用特定方法測得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度，一般應在85%～115%范圍內，在LLOQ附近應在80%～120%范圍內。［醫學(xué)教育 網(wǎng)搜集整 理］
4．定量下限
定量下限是標準曲線(xiàn)上的最低濃度點(diǎn)，要求至少能滿(mǎn)足測定3～5個(gè)半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/10～1/20時(shí)的藥物濃度，其準確度應在真實(shí)濃度的80%～120%范圍內，RSD應小于20%，信噪比應大于5.
5．樣品穩定性
根據具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間。
6．提取回收率
應考察高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率，其結果應一致、精密和可重現。
7．質(zhì)控樣品
質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于質(zhì)量控制。
8．質(zhì)量控制
應在生物樣品分析方法驗證完成之后開(kāi)始測試未知樣品。每個(gè)未知樣品一般測定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復測。生物樣品每天測定時(shí)應建立新的標準曲線(xiàn)，并隨行測定高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度雙樣本。質(zhì)控樣品測定結果的偏差一般應小于15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應小于20%，最多允許兩個(gè)不在同一濃度的質(zhì)控樣品結果超限。如不合格，則該天樣品測試結果作廢。
9．測試結果
應詳細描述所用的分析方法，引用已有的參考文獻，提供每天的標準曲線(xiàn)、質(zhì)控樣品及未知樣品的結果計算過(guò)程。還應提供全部未知樣品分析的色譜圖，包括全部相關(guān)的標準曲線(xiàn)和質(zhì)控樣品的色譜圖，以供審查。
二、普通制劑
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對參加生物利用度和生物等效性研究的受試者有一些特殊的要求。
1．受試者條件
一般情況選健康男性，特殊情況說(shuō)明原因，如婦科用藥。兒童用藥應在成人中進(jìn)行。具體要求如下。
?。?）性別為男性。
?。?）年齡一般要求18～40歲；同一批試驗年齡不宜相差10歲。
?。?）體重與標準體重相差±10%，同一批試驗受試者體重應相近，體重單位以千克（kg）計。
?。?）身體健康，無(wú)心、肝、腎、消化道、代謝異常、神經(jīng)系統疾病等病史，并進(jìn)行健康體檢（如檢查心電圖、血壓、心率、肝功能、腎功能、肺功能和血象等），應無(wú)異常。特殊藥物還需要相應的其他指標，如降血糖藥物應檢查血糖水平。
?。?）無(wú)過(guò)敏史，無(wú)體位性低血壓史。
?。?）兩周前至試驗期間不服用其他任何藥物，試驗期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料。
?。?）試驗單位應與志愿受試者簽署知情同意書(shū)。
2．受試者的例數
受試者必須具有足夠的例數，按有關(guān)規定要求18～24例，必要時(shí)可增加受試者人數。
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生物利用度和生物等效性研究，必須有參比制劑作對照。參比制劑的安全性和有效性應該合格，參比制劑選擇的原則為：進(jìn)行絕對生物利用度研究時(shí)選用上市的靜脈注射劑為參比制劑；進(jìn)行相對生物利用度或生物等效性研究時(shí)，應選擇國內外同類(lèi)上市主導產(chǎn)品作為參比制劑。
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受試制劑應為符合臨床應用質(zhì)量標準的放大試驗產(chǎn)品，提供體外溶出度、穩定性、含量或效價(jià)等數據。個(gè)別藥物尚需提供多晶型及光學(xué)異構體資料。
?。ㄋ模┰囼炘O計
對于兩個(gè)制劑，即一個(gè)為受試制劑，另一個(gè)為參比制劑，通常采用雙周期兩制劑交叉試驗設計，以抵消試驗周期和個(gè)體差異對試驗結果的影響。即將受試者隨機分成兩組，一組先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩個(gè)試驗周期之間為洗凈期，洗凈期應不少于藥物的10個(gè)半衰期，通常為1周或2周。
對于3個(gè)制劑，即兩個(gè)受試制劑和一個(gè)參比制劑，此時(shí)宜采用3制劑、3周期的二重3×3拉丁方式試驗設計。每個(gè)周期之間的洗凈期通常為1周或2周。
取樣點(diǎn)：取樣點(diǎn)的設計對試驗的可靠性起著(zhù)重要作用。服藥前取空白血樣。一個(gè)完整的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)應包括吸收相、分布相和消除相。一般在血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)峰前部至少取4個(gè)點(diǎn)，峰后部取6個(gè)或6個(gè)以上的點(diǎn)，峰時(shí)間附近應有足夠的取樣點(diǎn)，總采樣（不包括空白）不少于12個(gè)點(diǎn)。取樣—般持續到3～5個(gè)半衰期或血藥濃度為Cmax的1/10～1/20.
在不能用血藥濃度測定時(shí)，可采用其他生物樣品進(jìn)行測定，如尿液，但試驗藥品與試驗方案應符合生物利用度測定要求。［醫學(xué)教 育網(wǎng)搜集整理］
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進(jìn)行生物利用度與生物等效性研究時(shí)，藥物劑量一般應與臨床用藥劑量一致。受試制劑和參比制劑最好應用等劑量。如需使用不相等劑量時(shí)，應說(shuō)明原因，若藥物在此劑量范圍內符合線(xiàn)性動(dòng)力學(xué)規律，則計算生物利用度時(shí)應以劑量校正。
?。┭芯窟^(guò)程
受試者禁食過(guò)夜（10小時(shí)以上），于次日早晨空腹服用受試制劑或參比制劑，用250ml溫開(kāi)水送服。服藥后2小時(shí)后方可飲水，4小時(shí)后進(jìn)統一標準餐。受試者于服藥后，按要求在不同時(shí)間取靜脈血。根據需要取血樣（血漿、血清或全血），并冷凍貯存，備測。受試者服藥后避免劇烈活動(dòng)。取血樣在臨床監護室中進(jìn)行。如受試者有不良反應時(shí)應有應急措施，必要時(shí)應停止試驗。
?。ㄆ撸┧幬飫?dòng)力學(xué)分析
將所得的各受試者不同時(shí)間樣品的血藥濃度數據及平均值與標準差列表并作圖，然后分別對各受試者進(jìn)行有關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數求算，并求出參數的平均值和標準差。主要的藥物動(dòng)力學(xué)參數為消除半衰期（t1/2）、峰濃度（Cmax）、峰時(shí)間（Tmax）和血藥濃度時(shí)間曲線(xiàn)下面積AUC.Cmax、Tmax用實(shí)測值表示，不得內推。AUC0→tn（零到t時(shí)間的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下面積）用梯形法或對數梯形法計算，tn是最后一次可測濃度的取樣時(shí)間。AUC0→∞（零到無(wú)限大時(shí)間的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下面積）按下式計算，AUC0→∞=AUC0→tn+Ctn/λz.Ctn是最后一點(diǎn)的血藥濃度，λz是末端消除速度常數。t1/2=0.693/λz求出。λz用對數血藥濃度時(shí)間曲線(xiàn)線(xiàn)末端直線(xiàn)部分的斜率求得。
對于人體生物利用度試驗，要求從零時(shí)間至最終采血點(diǎn)（AUC0→tn/AUC0→∞）×100%＞80%.
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1．單次給藥
生物利用度F應用各個(gè)受試者的AUC0→tn和AUC0→∞分別計算，并求其均值與標準差。受試制劑（T）和參比制劑（R）劑量相同時(shí)
F=（AUC0→tn）T/（AUC0→tn）R×100%，F=（AUC0→∞）T/（AUC0→∞）R×100%
若受試藥物具有線(xiàn)性藥物動(dòng)力學(xué)特征時(shí)，受試制劑和參比制劑也可采用不同劑量，并按下式予以校正：
F=（AUC0→tn）T×DR/（AUC0→tn）R×DT×100%，F=（AUC0→∞）T×DR/（AUC0→∞）R×DT×100%
式中，DR為參比制劑的給藥劑量；DT為受試制劑的給藥劑量。受試制劑和參比制劑中藥物的劑量，應按實(shí)測含量計算。
代謝產(chǎn)物數據：對于前體藥物，或由于藥物在體內代謝極快，無(wú)法測定血中原形藥物，此時(shí)可采用相應的活性代謝物進(jìn)行生物利用度研究。
生物利用度的計算以AUC0→tn為主，參考AUC0→∞。
2．多次給藥
在下列情況下，可考慮多次給藥達穩態(tài)后，用穩態(tài)血藥濃度估算生物利用度：（1）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（2）生物利用度個(gè)體差異大；（3）緩釋、控釋制劑；（4）當單次給藥后原藥或代謝產(chǎn)物濃度很低，不能用相應的分析方法準確測得。
多次給藥，經(jīng)等間隔（τ）給藥至穩態(tài)后，在某一給藥間隔時(shí)間內，多次采集樣品，分析藥物濃度，計算在穩態(tài)劑量間隔期間從0～τ時(shí)間的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下的面積（AUCSS）。當受試制劑和參比制劑劑量相等時(shí)，即可用下式求得相對生物利用度
F=AUCSSTAUCSSR×100%
式中，AUCSST和AUCSSR分別代表受試制劑與參比制劑穩態(tài)條件下的AUC.
?。ň牛┥锏刃栽u價(jià)（藥物動(dòng)力學(xué)數據統計分析）
應對藥物動(dòng)力學(xué)主要參數（如AUC、Cmax）進(jìn)行統計分析，作出生物等效性評價(jià)。統計分析先將AUC和Cmax數據進(jìn)行對數轉換，然后進(jìn)行方差分析與雙單側t檢驗處理，若受試制劑參數AUC的90%可信限落在參比制劑80%～125%范圍內，Cmax落在參比制劑70%～143%范圍內，則認為受試制劑與參比制劑生物等效。Tmax可用非參數法進(jìn)行檢驗。
為了便于生物等效性比較，每一受試者服用不同制劑的藥物動(dòng)力學(xué)參數（AUC和Cmax）應平行列表，還要列出受試制劑（T）和參比制劑（R）參數之間的比值（T/R）和比值的對數。除了計算它們的算術(shù)均值外，還應該計算幾何均值，都應該包括在報告中。
?。ㄊ┡R床報告、副作用和不良反應
受試者病史、身體檢查和化驗結果，以及與研究相關(guān)的可能副作用和不良反應，均應報告。
三、緩釋、控釋制劑
緩釋、控釋制劑的生物利用度與生物等效性試驗應在單次給藥與多次給藥兩種條件下進(jìn)行。
?。ㄒ唬﹩未谓o藥雙周期交叉試驗
本試驗目的是在受試者空腹條件下，比較受試制劑與參比制劑的吸收速率和吸收程度，確認受試緩釋、控釋制劑與參比制劑是否為生物等效，并具有緩釋、控釋特征。
1．受試者要求與選擇標準
同普通制劑。
2．參比制劑
一般應選用國內外同類(lèi)上市的緩釋、控釋制劑主導產(chǎn)品為參比制劑。若系創(chuàng )新的緩釋、控釋制劑，則應選擇國內外上市的同類(lèi)普通制劑主導產(chǎn)品為參比制劑。
3．試驗過(guò)程
同普通制劑單次給藥。
4．提供數據
?。?）列出各受試者的血藥濃度-時(shí)間數據、血藥濃度平均值與標準差，列表并作圖。
?。?）計算各受試者藥物動(dòng)力學(xué)參數并求平均值與標準差。Cmax、Tmax、AUC0→tn、AUC0→∞和F；盡可能提供其他參數如平均滯留時(shí)間（MRT）等。
?。?）臨床報告、副作用和不良反應與普通制劑的要求相同。
5．生物等效性評價(jià)
若受試緩釋、控釋制劑與參比緩釋、控釋制劑比較，AUC、Cmax符合生物等效性要求，Tmax統計上應無(wú)顯著(zhù)差異，則認為兩種制劑生物等效。若受試緩釋、控釋制劑與普通制劑比較，AUC符合生物等效性要求（同普通制劑AUC生物等效性評價(jià)）則認為吸收程度生物等效；若Cmax有所降低，Tmax有所延長(cháng)，并按（九）進(jìn)行統計分析，其結果至少有一項指標不符合生物等效時(shí)，則表明受試制劑有緩釋或控釋特征。
?。ǘ┒啻谓o藥雙周期交叉試驗
本試驗目的是研究受試緩釋、控釋制劑與參比制劑多次給藥達穩態(tài)的速率與程度以及穩態(tài)血藥濃度的波動(dòng)情況。
1．受試者要求及選擇標準
同單劑量項下，可繼續用單劑量的受試者。受試者至少為18～24例，必要時(shí)可以適當增加。參比制劑同單次給藥。
2．試驗設計及過(guò)程
采用隨機交叉試驗設計方法，多次服用受試制劑與參比制劑。對于受試制劑，用擬定的用藥劑量和方案。每日1次用藥的制劑，受試者應在空腹10小時(shí)以后晨間服藥，服藥后繼續禁食2～4小時(shí)；每日2次的制劑，首劑應空腹10小時(shí)以后服藥，服藥后繼續禁食2～4小時(shí)，第二次應在餐前或餐后2小時(shí)服藥，服藥后繼續禁食2小時(shí)。每次用250ml溫開(kāi)水送服，一般要求服藥1～2小時(shí)后，方可再飲水。以普通制劑為參比制劑時(shí)，按常規用藥劑量與方法，但應與緩釋、控釋受試制劑每日總劑量相等。［醫學(xué)教育網(wǎng)搜集整理］
3．取樣點(diǎn)的設計
連續服藥時(shí)間至少經(jīng)過(guò)7個(gè)消除半衰期后，連續測定3天的谷濃度（Cmin），以確定血藥濃度是否達穩態(tài)。取樣點(diǎn)最好安排在不同天的同一時(shí)間（一般清晨），以抵消時(shí)辰對藥代動(dòng)力學(xué)的影響，且便于比較。達穩態(tài)后，在最后一劑量間隔內，參照單次給藥采樣時(shí)間點(diǎn)設計，采取足夠血樣點(diǎn)，測定該間隔內穩態(tài)血藥濃度時(shí)間數據，計算有關(guān)的藥物動(dòng)力學(xué)參數如峰濃度、峰時(shí)間、穩態(tài)平均血藥濃度（Cav）和AUCSS等。
4．藥物動(dòng)力學(xué)數據處理
?。?）列出各受試者的血藥濃度時(shí)間數據、血藥濃度平均值與標準差，列表并作圖。
?。?）求出各受試者的Cmax、Cmin、Tmax、Cav、AUCSS及各參數的平均值與標準差。Cmax、Tmax按實(shí)測值，Cmin一般按最后一劑量間隔服藥前與τ時(shí)間實(shí)測谷濃度的平均值計算，AUCSS按梯形法計算。
穩態(tài)平均血藥濃度可用下式求出
Cav=AUCSSτ
式中，AUCSS是在穩態(tài)劑量間隔期間從0～τ時(shí)間的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下的面積；τ是服藥間隔時(shí)間。
?。?）計算穩態(tài)時(shí)的生物利用度
F=（AUCSS）T/（AUCSS）R×100%，F=（AUCSS）T×DR/（AUCSS）R×DT×100%
?。?）血藥濃度的波動(dòng)度DF（%）可用下式計算
DF=（Cmax-Cmin）/Cav×100%
式中，Cmax是穩態(tài)給藥期間最后一個(gè)給藥劑量的實(shí)測藥物峰濃度值；Cmin是穩態(tài)給藥期間最后一個(gè)給藥劑量實(shí)測的谷濃度。當參比制劑亦為緩釋制劑時(shí)，則受試制劑的DF/τ值為不大于參比制劑DF/τ值的143%，當參比制劑為普通制劑時(shí)，受試制劑的DF/τ值應顯著(zhù)小于普通制劑。
?。?）統計學(xué)分析和生物等效性評價(jià)
與緩釋、控釋制劑單次給藥的方法和要求相同。
?。?）臨床報告、副作用和不良反應
與普通制劑的要求相同
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