Q1. 有新的證據表明，某些微生物可以對免疫系統對抗癌癥這一過(guò)程產(chǎn)生積極或消極的影響。請您談一下對微生物塑造免疫系統以影響抗腫瘤免疫機制的理解。
B. BrettFinlay.(B.B.F.): 毫無(wú)疑問(wèn)，微生物可以塑造免疫系統。它們在生命早期推動(dòng)免疫系統向預過(guò)敏或非過(guò)敏方向發(fā)展，影響許多免疫介導性疾病的易感性（如哮喘、食物過(guò)敏和濕疹）。大量小鼠研究表明，生命后期的免疫系統功能會(huì )隨微生物的改變而發(fā)生變化。直到現在我們仍然不了解微生物影響抗腫瘤免疫的機制。Romina Goldszmid.(R.G.):我同意B.B.F.的觀(guān)點(diǎn)，人們對于這一過(guò)程的機制還存在爭議。目前發(fā)現了許多不同的情況，其中細菌、細菌產(chǎn)物和/或細菌代謝物均可以通過(guò)調節免疫系統的組成成分來(lái)影響腫瘤免疫過(guò)程。細菌及其產(chǎn)物可能以髓系細胞為目標（如它們可能激活抗原提呈細胞，促進(jìn)抗腫瘤T細胞反應的發(fā)生，調節促炎細胞因子和活性氧的產(chǎn)生，或調節髓系細胞免疫抑制活性）。細菌也可以作為抗原，通過(guò)分子模擬（即識別細菌表位的T細胞可以識別腫瘤細胞表達的類(lèi)似表位）或激活T細胞來(lái)影響腫瘤免疫反應。此外，還有人提出了細菌產(chǎn)物在腫瘤中誘導免疫原性細胞死亡和隨后免疫激活的間接機制。腫瘤類(lèi)型和治療方式不同，其機制可能會(huì )有所不同。到目前為止，大部分的研究工作都集中在細菌微生物的作用上，而對病毒、真菌和寄生蟲(chóng)對抗腫瘤免疫的貢獻知之甚少。
KenyaHonda.(K.H.): 多項研究表明，微生物群可以通過(guò)系統激活CD8+ T細胞亞群（特別是γ干擾素(IFN-γ)）增強免疫檢查點(diǎn)阻斷。從理論上講，這一過(guò)程可能涉及多種體循環(huán)機制：(1)腸道誘導的CD8+ T細胞，(2)細菌抗原或裝載細菌的樹(shù)突狀細胞，(3)細菌代謝物(由微生物群誘導或產(chǎn)生)和/或細胞因子。在實(shí)驗室環(huán)境中，由于系統循環(huán)和調節遠端組織的抗腫瘤免疫（如在腸道內和腸道外腫瘤中積累的IFN+ CD8+ T細胞表型）是不同的，因此腸道來(lái)源的CD8+ T細胞不太可能遷移出腸道。細菌抗原或載滿(mǎn)細菌的樹(shù)突狀細胞的體循環(huán)也不太可能發(fā)生，因為T(mén)細胞在不同部位的受體或抗原特異性沒(méi)有重疊。那么最可能的解釋是腫瘤中CD8+ T細胞的積累是由于免疫調節分子和/或來(lái)自微生物群的代謝物的循環(huán)。由于主要的先天免疫信號通路的免疫調節似乎是獨立發(fā)生，因此可能是代謝物負責形成CD8+ T細胞的抗腫瘤免疫反應，而不是微生物相關(guān)的分子模式。
GiorgioTrinchieri.(G.T.): 微生物群還調節單核細胞衍生細胞和中性粒細胞的腫瘤浸潤。革蘭氏陰性細菌可以響應CpG寡聚脫氧核苷酸（通過(guò)脂多糖介導的Toll樣受體4(TLR4)信號轉導）引發(fā)髓樣細胞產(chǎn)生免疫調節細胞因子（如腫瘤壞死因子(TNF)和白細胞介素12（IL-12））。微生物細胞介導的骨髓細胞引發(fā)活性氧的產(chǎn)生會(huì )影響鉑類(lèi)化學(xué)療法藥物的抗腫瘤功效。微生物代謝產(chǎn)物（如短鏈脂肪酸）和其他產(chǎn)物調節調節性T細胞和細胞毒性T淋巴細胞。在小鼠肝癌模型中，腸道微生物群中存在的梭狀芽孢桿菌將原發(fā)性膽汁酸轉化為繼發(fā)性膽汁酸，降低了肝臟中原發(fā)性膽汁酸誘導的CXC-趨化因子配體16（CXCL16）的表達；因為這種趨化因子吸引具有抗腫瘤活性的自然殺傷性T細胞，這些細菌與抗腫瘤活性降低有關(guān)。JenniferWargo.(J.W.): 正如G.T.所說(shuō)的，存在于在腫瘤內和腸道菌群中特定的微生物微生物群落可以對癌癥的免疫反應產(chǎn)生積極或消極的影響。大量證據顯示這一過(guò)程與腸道微生物有關(guān)，其群落多樣性和組成差異的增加可以促進(jìn)抗腫瘤免疫反應。腸道微生物可通過(guò)在腸道和腸系膜淋巴結水平上的相互作用以及代謝產(chǎn)物和其他循環(huán)因子介導的更多遠端效應來(lái)調節抗腫瘤免疫和普通免疫。在過(guò)去的幾年中，我們對所涉及的機制有了一些見(jiàn)識，但仍有很多東西需要進(jìn)一步研究來(lái)對機制有進(jìn)一步了解。Laurence Zitvogel.(L.Z.):我個(gè)人認為有四個(gè)獨立但不相互排斥的主要機制可以解釋不同共生體在腫瘤免疫監測中的抑制作用。第一，直接為免疫系統提供抗原性和佐劑性。第二，確保上皮屏障的適應性。第三，調節宿主的新陳代謝。第四，調節微生物群落的生態(tài)系統（共生共存網(wǎng)絡(luò )對體內平衡至關(guān)重要）。已有研究表明腸道共生體（如多形擬桿菌和海氏腸球菌）和自身抗原或腫瘤細胞相關(guān)抗原出現在自身免疫性疾病和癌癥中，這可以解釋T細胞池調動(dòng)通常發(fā)生在腸道,但有向遠端腸道和腸道外的炎性病變發(fā)展的趨勢。雙歧桿菌或脆弱擬桿菌和黏液阿克曼菌可以介導對腫瘤引流淋巴結中存在的樹(shù)突狀細胞產(chǎn)生輔助作用，從而觸發(fā)1型干擾素或IL-12，這是與保護1型輔助T細胞（TH1細胞）和CD8+ T細胞相關(guān)的抗腫瘤免疫反應。通過(guò)直接影響上皮完整性，抗癌治療（如化療、酪氨酸激酶抑制劑或抗CTLA4免疫檢查點(diǎn)阻斷）調節微生物群組成，最終導致腸上皮細胞（IECs）凋亡，這一過(guò)程主要發(fā)生在腸隱窩。根據回腸菌群的組成，IECs凋亡可以是免疫原性的或致耐受性的，因此可以調節抗腫瘤免疫監測。與微生物群落從專(zhuān)性厭氧菌向兼性厭氧菌的轉變相關(guān)的生態(tài)失調會(huì )導致定植變形桿菌豐度的增加，這與免疫檢查點(diǎn)封鎖的抗性有關(guān)。在IECs上，微生物依賴(lài)的MHC II類(lèi)表達上調也可引發(fā)移植物抗宿主?。℅VHD），從而控制某些血液惡性腫瘤。Q2. 我們是否已經(jīng)了解一個(gè)“好”的微生物群的構造？這也會(huì )取決于環(huán)境嗎？例如，促進(jìn)抗癌免疫的微生物群還會(huì )增加自身免疫嗎？
B.B.F.: 這仍然是微生物領(lǐng)域的一個(gè)主要問(wèn)題。我們可以區分患有特定疾病的個(gè)體和健康個(gè)體體內存在的益生菌群，但如何定義正常的微生物群仍是未解之謎。部分微生物學(xué)家強烈希望定義單個(gè)微生物物種或可操作的分類(lèi)單元。然而，我認為重點(diǎn)應該放在一個(gè)真正好的微生物群能做什么。多項抗癌研究發(fā)現菌群間的通路存在著(zhù)主要的冗余，這意味著(zhù)兩個(gè)菌群可以執行相同的功能，因此菌群個(gè)體間存在著(zhù)主要的異質(zhì)性。R.G.: 人們對這一問(wèn)題還未達成共識。事實(shí)上，微生物群的組成在不同的健康人群中存在巨大差異。試想如果一個(gè)人是健康的，那么我們是否可以認為他同樣擁有良好的微生物群落？其實(shí)應綜合考慮多方面因素，例如，宿主遺傳，飲食，地理位置和生活方式，處于動(dòng)態(tài)變化的微生物群組成和功能狀態(tài)。由于個(gè)體和環(huán)境的差異，對某一個(gè)體有益的微生物可能不適用所有人群。K.H.: 良好微生物群落的共性仍然難以捉摸。即使是單一有益菌群的概念也是模棱兩可的，因為不同的成分可能保護了不同宿主的不同微生物。細菌存在于一個(gè)特定的，由宿主衍生的因子和微生物群落的其他成員共同構成的生態(tài)系統，它通過(guò)依賴(lài)環(huán)境的方式發(fā)揮作用。同樣，微生物誘導的T細胞的免疫效應同樣依賴(lài)于環(huán)境，因此個(gè)體之間存在差異。
但我認為，能夠有效促進(jìn)抗癌免疫的菌群不一定會(huì )誘導自身免疫，因為它們可以在不影響CTLA4和PD1的表達以及調節性T細胞和自效應T細胞的頻率的情況下介導效應T細胞激活。因此，在我看來(lái)，一個(gè)良好的微生物群可以增強對非自身免疫反應（包括腫瘤新抗原），而不會(huì )破壞免疫耐受。G.T.: 微生物對炎癥和免疫的調節在癌癥預防和治療中具有不同的作用。在各種研究中發(fā)現的對抗PD1治療有積極作用的細菌種類(lèi)不同，這可能是由于人體腸道菌群組成的個(gè)體差異以及環(huán)境因素（如飲食和地理分布）的影響。在人群研究中確定健康供體和患者的腸道菌群類(lèi)型有助于消除環(huán)境和地理混淆變量，并確定有利于抗腫瘤反應的菌群組成。我們發(fā)現，在某些情況下，相同的細菌種類(lèi)可能與抗腫瘤免疫水平和免疫治療后發(fā)生的免疫相關(guān)不良事件有關(guān)，盡管Laurence的研究小組已經(jīng)報道分離出自身免疫誘導的抗CTLA4治療的增強作用的細菌。J.W.: 許多有關(guān)人類(lèi)的研究證明不同癌癥類(lèi)型中反應者和無(wú)反應者腸道微生物組的差異特征。然而，在這些組群中確定的類(lèi)群之間有僅有部分重疊。一項研究表明，具有“1型”腸道菌群特征的患者腸道中存在大量有利微生物（如瘤胃菌科），更有可能對免疫檢查點(diǎn)阻斷治療產(chǎn)生應答。值得注意的是，產(chǎn)生這種變化的原因可能不是某一特定的類(lèi)群，而是微生物群落的整體功能發(fā)揮作用。研究表明，一個(gè)特定微生物群落的功能可能比該群落內微生物的分類(lèi)學(xué)分類(lèi)重要得多，這支持了功能大于系統發(fā)育的概念。盡管有人認為促進(jìn)抗癌免疫的特定微生物群也可能增加自身免疫，但有證據表明恰恰相反。即與更好的抗腫瘤免疫反應相關(guān)的腸道微生物群實(shí)際上也與較低的自身免疫可能性有關(guān)。同時(shí)，微生物多樣性的降低與治療毒性的增加有關(guān)。L.Z.: 在我看來(lái)，我們在逐步揭示有益和有害的微生物群落的成分。相比之下，其他的共生體（如兼性厭氧菌變形桿菌和腸桿菌）可以利用IEC應激，并與免疫檢查點(diǎn)阻斷或化療耐藥性相關(guān)。在抗PD1或抗PDL1治療前1個(gè)月使用抗生素會(huì )抑制腎癌和肺癌的免疫檢查阻斷效果，殺死有益細菌（包括瘤胃菌科和梭菌科）。然而，一個(gè)特殊的共生體菌株產(chǎn)生的影響是好是壞取決于環(huán)境。例如，多形擬桿菌可以表達組成心肌的肽模擬肌球蛋白重鏈，因此在患自體免疫性心肌炎的背景下，這種共生體可以引發(fā)產(chǎn)生致病性IL-17的T輔助細胞（TH17細胞）反應；然而，在抗CTLA4的癌癥免疫治療中，多形擬桿菌也能促進(jìn)保護性的IL-12依賴(lài)性TH1型免疫應答。再比如某些品種的雞腸球菌在單藥治療小鼠時(shí)顯示出抗腫瘤活性，而其它品種與小鼠和人類(lèi)系統性紅斑狼瘡的發(fā)展有關(guān)。Q3.改變病人現有的微生物群以提高免疫治療效果的可行性有多大？有一天生物制劑會(huì )成為癌癥治療的一個(gè)組成部分嗎？
B.B.F.: 目前正在進(jìn)行改變微生物群的工作，像Vedanta這樣的公司正在積極進(jìn)行活微生物混合物的臨床試驗。本質(zhì)上講，用抗生素（擾亂常駐微生物）或抗炎劑（讓進(jìn)入的微生物混合物自行建立生態(tài)系統）進(jìn)行預處理可以幫助個(gè)體替代或增強一個(gè)生態(tài)系統。毫無(wú)疑問(wèn)，在接下來(lái)的幾年里，將會(huì )有確定的微生物混合物被用作治療疾病的生物制劑。有幾個(gè)小組正在嘗試用這種方法在老鼠體內做實(shí)驗治療癌癥，結果顯示如果能建立正確的微生物混合物，這種方法有可能是可行的。R.G.: 有許多不同的方法供我們使用：糞便移植，轉移確定的細菌混合物或單個(gè)細菌分離物，用益生元或通過(guò)飲食干預來(lái)改變現有微生態(tài)或個(gè)別菌群，以及從整體（使用廣譜抗生素）到局部改變菌群（使用窄譜抗微生物劑或噬菌體）。然而這些方法應該單獨使用還是同時(shí)使用還不清楚。有越來(lái)越多的證據表明微生物群會(huì )影響治療結果，因此，是時(shí)候考慮在未來(lái)將微生物群作為癌癥治療的一個(gè)組成部分。
K.H.: 有關(guān)健康供體或治療反應者的糞便微生物群移植（FMT）的初步研究顯示微生物群的結構組成可以被控制。但是，考慮到FMT的機理和成分的不確定性，我認為由一組特征良好的細菌組成的微生物療法既可行，也更理想。相反，在復雜的常駐菌群中實(shí)現外源菌株的穩定移植是有挑戰性的。研究表明，穩定的移植可由外部因素促進(jìn)，如營(yíng)養和抗生素。補充特定的營(yíng)養素可以為特定的寄生共生體提供底物，以此誘導腸道菌群的系統發(fā)育和功能重組，從而創(chuàng )造更有利于外源細菌移植的環(huán)境。G.T.: 成人的菌群是有彈性的，如果不消除現有的菌群，就很難誘導患者菌群發(fā)生重建。我們在老鼠身上的實(shí)驗結果顯示，FMT以及飲食變化影響有可能改善正在接受抗PD1接受治療的黑色素瘤患者的抗腫瘤免疫反應。然而我們仍然需要深入了解有利于抗腫瘤反應微生物群組成以及潛在的機制來(lái)判別它是否可以廣泛的應用于臨床。正如Romina所說(shuō)，這些可能最終會(huì )成為癌癥治療的標準程序。J.W.: 美國癌癥研究協(xié)會(huì )在2019年年會(huì )上發(fā)表的兩項研究表明，改變病人現有的微生物群來(lái)提高免疫治療的效果是可行。有多種不同的方法可以用來(lái)調節腸道菌群，但最合適的方法必然要考慮許多因素（如治療期間的飲食）。L.Z.: 正如之前提到的，使用FMT暫時(shí)影響癌癥患者菌群的組成是可行的。我們推測不論異體菌群是否成功在受體上定居，患者都將受益于此。然而，糞便樣本的最佳選擇所采用的標準仍是未知的（基于最佳成分或基于健康狀況完整應答者與健康志愿者仍有待定義）。我設想有一天單克隆益生菌或極簡(jiǎn)生態(tài)系統不會(huì )導致阿爾法多樣性的減少和具有調節生物活性（而不是免疫刺激活性）的微生物群落的補償性增加，此時(shí)抗癌益生菌將取代FMT。此外，使用生物療法可能比連續治療更有利。
Q4. 2013年發(fā)表的開(kāi)創(chuàng )性研究表明，微生物的損耗會(huì )損害化療和免疫療法的效果。我們是否應該重新思考如何給癌癥患者使用抗生素？
B.B.F.: 抗生素耐藥性問(wèn)題在很早之前就被重視，但我們現在發(fā)現，它們也會(huì )長(cháng)期干擾微生物群落。因為癌癥患者接受很多抗生素治療，因此抗生素在癌癥患者中的使用問(wèn)題應被重視。需要注意的是，不同的抗生素會(huì )影響不同的微生物，它們不能混為一談。一些抗生素對免疫治療的影響是好是壞目前還是未知的。確定免疫治療涉及的微生物種類(lèi)將有助于指導抗生素的治療。R.G.: 有關(guān)癌癥患者的研究對于在治療開(kāi)始前不久或短時(shí)間使用抗生素是否會(huì )降低化療和免疫治療的療效存在爭議。然而，所有這些研究均需要進(jìn)行大規模的前瞻性臨床試驗。在癌癥治療中使用抗生素會(huì )增加毒性作用（如GVHD相關(guān)的死亡率增加），矛盾的是，接受造血干細胞移植的血液惡性腫瘤患者感染的風(fēng)險更高。及時(shí)治療癌癥患者的感染至關(guān)重要；因此，如何在這些患者中正確使用抗生素以盡量減少對微生物群損害需要進(jìn)一步研究。K.H.: 這些研究讓我們重新思考抗生素在癌癥中的應用。幾項研究報告稱(chēng)，微生物群的多樣性與有效的癌癥免疫相關(guān)。臨床使用抗生素會(huì )削弱免疫檢查點(diǎn)阻斷的效果。臨床醫生傾向于在機會(huì )性感染概率大的情況下預防性地使用抗生素（如免疫功能低下的患者）。一個(gè)高度多樣化的微生物群可以通過(guò)多種機制抑制病原體感染的能力，包括通過(guò)營(yíng)養競爭、抗菌產(chǎn)品的分泌和激活宿主免疫系統。因此，除了能增強抗癌免疫的效應菌群外，識別有利于抑制病原體入侵的細菌也很重要。以活性細菌療法的形式綜合利用這些微生物可以在不使用抗生素的情況下，同時(shí)根除腫瘤以及對抗機會(huì )性感染。G.T.: 這些研究使用了大量抗生素，幾乎完全消滅了腸道微生物群，這并不能代表抗生素的臨床應用。一些研究表明，單一抗生素的使用不僅可以促進(jìn)抗腫瘤反應（如通過(guò)影響膽汁酸代謝），也可以逆轉腫瘤相關(guān)細菌對藥物分解代謝和免疫抑制腫瘤微環(huán)境的影響。然而，最近許多研究表明，在抗PD1治療前60天使用抗生素會(huì )顯著(zhù)降低治療的效果。這提示癌癥患者應避免使用不必要的抗生素，并在使用抗生素后推遲免疫治療的起始時(shí)間。J.W.: 正如之前所說(shuō)的，腸道微生物的改變可能會(huì )影響免疫檢查點(diǎn)阻斷的效果。有研究表明，在癌癥患者開(kāi)始免疫檢查點(diǎn)阻斷治療前使用抗生素會(huì )降低患者存活率以及治療效果。目前，我們對此理解仍不全面，因此需要做更多的研究來(lái)全面了解抗生素（以及其他藥物和因素，如飲食）是如何通過(guò)影響腸道和其它部位的菌群來(lái)影響癌癥的發(fā)展和癌癥治療療效的。綜上所述，我們在未來(lái)可能需要謹慎使用抗生素。L.Z.: 在12項回顧性研究中，有11項研究表明肺癌、腎癌或黑色素瘤患者接受靶向PD1或PDL1的免疫檢查點(diǎn)封鎖治療時(shí)，抗生素對其臨床結果有負面影響。在兩個(gè)三級學(xué)術(shù)轉診中心進(jìn)行的一項多中心隊列研究招募了196名癌癥患者，這些患者在2015年至2018年之間按常規臨床實(shí)踐（而非臨床試驗）接受了免疫檢查點(diǎn)阻斷療法。這項研究前瞻性地證實(shí)了在常規臨床實(shí)踐中，未經(jīng)選擇的接受免疫檢查點(diǎn)阻斷治療的患者，先前的抗生素治療與較差的客觀(guān)反應和總體生存率有關(guān)。然而，許多問(wèn)題仍未得到解答，如抗生素治療后微生物群組成的特征、已使用的抗生素的持續時(shí)間和頻率，以及潛在的混淆因素（如較差的體質(zhì)）。許多癌癥中心正在考慮如何延遲首次抗PD1或抗PDL1的治療時(shí)間，并縮短抗生素的使用時(shí)間。Q5. 您如何看待益生菌在癌癥免疫治療中的潛在作用？
B.B.F.: 雖然某些益生菌對某些疾病可能起作用，但經(jīng)過(guò)嚴格臨床試驗的卻很少。樂(lè )觀(guān)來(lái)看，未分離出能夠在腸道中定植的第二代益生菌混合物用以幫助宿主建立一個(gè)新的微生物生態(tài)系統是可行的。我相信在不久的將來(lái)，人們可以發(fā)現增強癌癥免疫治療的微生物混合物，將其作為常規藥物。R.G.: 我們需要謹慎對待這個(gè)問(wèn)題。人們普遍認為益生菌對人體有益，但這是相對的，并需要綜合考慮幾個(gè)因素（包括宿主菌群、醫療條件和飲食）?！耙嫔笔腔钗⑸?，當給予足夠的量時(shí)，對宿主的健康有益。然而，沒(méi)有足夠的科學(xué)證據證明其有效性，也沒(méi)有任何藥物被監管機構（如美國食品和藥物管理局）批準用于任何治療用途；相反，它們被許可作為膳食補充劑使用。例如，非處方益生菌被廣泛用于幫助恢復抗生素治療后的腸道菌群。然而最近的研究表明，它們可能具有完全相反的效果，這突出了仔細研究的必要性。一般來(lái)說(shuō)，非處方益生菌的抗炎特性可以減輕胃腸道疾病的反應。目前微生物群落在癌癥免疫治療中的作用尚未得到適當的評估。這并不意味著(zhù)，新鑒定的益生菌，應該包括具有明確安全性和有效性的特定健康效應的特定菌株（單個(gè)或聯(lián)合），可能在未來(lái)的癌癥免疫治療中沒(méi)有幫助。
K.H.: 發(fā)酵后的傳統益生菌被用于保存食品；它們并不是出于特定目的從人類(lèi)中合理被合理分離，不一定屬于正常微生物群。此外，接種單一菌株不能恢復正常的健康菌群中的多樣性，并且缺乏強有力，長(cháng)期益生菌植入的證據。因此，我認為常規的益生菌在臨床上至多具有中等程度的作用，從健康的供體或治療反應者中分離出來(lái)的合理設計的微生物混合物可能會(huì )更有效。G.T.: 傳統的商業(yè)益生菌不太可能使接受免疫治療的患者受益，相反，它們可能會(huì )改變微生物群的組成和多樣性并破壞穩態(tài)，因此可能產(chǎn)生負面影響。然而，一些益生菌含有的細菌（如雙歧桿菌）在實(shí)驗動(dòng)物模型和癌癥患者體內都能增強免疫治療的效果。目前正在使用單一細菌菌株或已被初步確定為促進(jìn)免疫療法的細菌組合進(jìn)行臨床試驗。確定有利的細菌種類(lèi)及其作用機制、在患者體內的定植能力和互作方式可能對提高免疫治療效果有重大參考意義。J.W.: 目前，在癌癥患者中還沒(méi)有進(jìn)行非處方益生菌的廣泛試驗。甚至有證據表明，那些報告服用非處方益生菌的患者在接受癌癥免疫治療后，其菌群多樣性更低，療效更差。臨床前模型的證據表明，在結直腸癌模型中，使用非處方益生菌與腫瘤發(fā)生增加有關(guān)。因此，癌癥患者對此應該謹慎對待。但是，我們需要把握機會(huì )，在進(jìn)行廣泛的測試以確保其功效的基礎上合理設計下一代益生菌。L.Z.: 盡管益生菌通常被認為可以補償在使用抗生素、化療和放療治療后出現的腹瀉副作用，但許多益生菌菌株和制劑的結果是相互矛盾的。臨床前和回顧性研究似乎表明，益生菌的使用可能降低腸道菌群的α多樣性，影響免疫檢查點(diǎn)阻斷的療效。因此，我們仍然需要評估單個(gè)微生物菌株在腸道定植的方式和對宿主代謝和免疫系統的影響。在廣泛和非靶向使用之前，這些研究需要在不同類(lèi)型癌癥患者的自身菌群的背景下進(jìn)行。Q6. 在你看來(lái)，這個(gè)領(lǐng)域仍然面臨的關(guān)鍵問(wèn)題和最大的爭議是什么？
B.B.F: 我認為在動(dòng)物模型和人類(lèi)身上都有充分的初步證據表明微生物可以影響癌癥免疫治療。然而，仍有許多問(wèn)題有待解決。如：涉及的機制是什么？涉及哪些微生物？微生物會(huì )產(chǎn)生什么分子來(lái)影響免疫治療？我們能否開(kāi)發(fā)出一種可靠的微生物群篩查方法，以識別受益人群與無(wú)反應人群？最后，所有這些信息能否用于開(kāi)發(fā)活細菌混合物和微生物分子以用于臨床上接受免疫治療的患者。R.G.: 關(guān)鍵問(wèn)題是這一切是如何運作的？進(jìn)一步了解可以解決目前的爭議（如，不同的研究人員發(fā)現與治療結果相關(guān)的不同細菌類(lèi)群，以及有關(guān)抗生素對反應率的正面和負面影響的報道）。另一個(gè)問(wèn)題是它是如何隨時(shí)間變化的？微生物群落、宿主免疫系統和癌細胞之間的相互作用不僅復雜，而且是高度動(dòng)態(tài)的。這可能意味著(zhù)，在整個(gè)疾病/治療過(guò)程中，將需要不同的微生物針對性療法。就目前我們對這些過(guò)程的了解很可能只是觸及了表面。K.H.: 大量的研究鑒定出許多不同的可以促進(jìn)癌癥患者免疫檢查點(diǎn)阻斷效果的細菌。關(guān)鍵問(wèn)題是這些細菌是通過(guò)保守的功能途徑增強了對免疫檢查點(diǎn)的阻斷，還是通過(guò)簡(jiǎn)單的機制促進(jìn)了相同的表型。如果保守的代謝途徑起作用，那未來(lái)可以將一組功能冗余的細菌一起使用，以穩定移植給不同患者的成功率。G.T.: 展望未來(lái)，我認為我們的主要目標如下。首先，我們需要通過(guò)消除混淆變量（如早期生活環(huán)境、生活方式和地理差異）來(lái)預測有利于抗腫瘤免疫的微生物群組成。其次，我們需要確定特定的分類(lèi)和/或代謝途徑以及產(chǎn)品的微生物群調節抗腫瘤免疫。第三，我們必須確定發(fā)生在宿主免疫系統和微生物群之間的交互作用的機制。第四，我們應該將這些分析擴展到理解腸道之外的屏障組織中的微生物群，定義與腫瘤相關(guān)的微生物群的作用，并闡明微生物群中其它非細菌成分的作用，如真菌、病毒、噬菌體和原生動(dòng)物。最后，一旦單個(gè)菌株或混合物被確定，我們需要評估它們在患者體內的定殖能力，以及在現有微生物群落生態(tài)中以功能狀態(tài)共存的能力。J.W.: 首先，什么是完美的腸道菌群？這種完美的微生物群促進(jìn)了對癌癥免疫治療的反應，是否也有助于預防癌癥的發(fā)生？它能增強對疫苗的反應并促進(jìn)整體免疫系統的健康嗎？第二，腫瘤微生物群的影響是什么？我們能把它作為癌癥預防的目標嗎？最后，我們如何協(xié)調微生物研究？L.Z.: 首先，我們如何在臨床上定義腸道生態(tài)失調，并開(kāi)發(fā)合適的工具來(lái)進(jìn)行準確診斷？第二，腸道生態(tài)失調是晚期癌癥的原因和/或結果嗎？如果是，那對任何一種癌癥都適用嗎？還是只適用于特定類(lèi)型的癌癥？第三，腸道生態(tài)失調是否會(huì )導致癌癥免疫治療的主要耐藥性？最后，我們是否可以通過(guò)干預癌癥相關(guān)的腸道生態(tài)失調來(lái)治愈這種疾??？如果可以，這種治療效果可以維持多長(cháng)時(shí)間？
