感染(infection)是病原體(pathogen)和人體在一定條件下相互作用的病理過(guò)程,感染的病原體包括各種細菌、病毒、寄生蟲(chóng)、真菌、支原體、衣原體、螺旋體等。病原體的來(lái)源可分為外源性和內源性感染兩種類(lèi)型。外源性感染是由于外界的病原體侵入人體,如志賀菌、結核分枝桿菌、人免疫缺陷病毒(HIV)等引起的感染。內源性感染是人體內經(jīng)常寄生的微生物,如大腸埃希菌、腸球菌、某些真菌等在一定條件下引起的感染。感染后是否引起感染性疾?。╥nfection diseases)與病原體的數量、毒力和人體的抵抗力有關(guān),并決定感染的發(fā)生、發(fā)展和結局。病原體感染后機體可以出現不感染、隱性感染(covert infection)、顯性感染(overt infection)、持續性感染(persistent infection)或病原體攜帶狀態(tài)(carrier state)幾種類(lèi)型。感染性疾病是由于感染的病原體毒力強、數量多,超過(guò)了機體的抵御能力,定植在機體一定部位增殖、擴散或蔓延、釋放毒素,引起機體免疫病理反應,導致組織、器官等損傷,生理功能紊亂,并出現一系列的臨床癥狀和體征。感染性疾病的檢查主要包括病原體的檢查、感染的血清學(xué)試驗等,并由此確定感染性疾病的發(fā)生和性質(zhì);通過(guò)病原體的藥物敏感試驗、耐藥株監測和醫院感染的監測報告,為臨床感染性疾病的最佳治療藥物選擇,采取最有效的預防措施,防止感染的傳播或流行提供及時(shí)、有效的實(shí)驗數據。
隨著(zhù)現代社會(huì )與臨床醫學(xué)的發(fā)展,目前感染性疾病的流行病學(xué)特點(diǎn)發(fā)生了明顯變化,主要體現在以下幾個(gè)方面:①由強毒性病原體引起感染的疾病,如鼠疫、白喉、傷寒、天花、小兒麻痹逐漸減少或絕跡,而條件致病的病原體引起的感染、醫院感染逐漸增多。②由新的病原體、原有的病原體變異引起的新感染性疾病,如艾滋?。ˋIDS)、瘋牛病、O157出血性腸炎、嚴重急性呼吸綜合征(severe acute respiratory syndrome, SARS)等陸續出現。③以前的感染性疾病,如淋病、梅毒、結核病等又重新流行。④多重耐藥株,如耐萬(wàn)古霉素的腸球菌(VRE)、耐苯唑西林的葡萄球菌(MRS)、耐異煙肼的結核桿菌等,導致抗感染治療無(wú)效或低效。因此,臨床感染性疾病的檢查應密切結合上述新的變化趨勢進(jìn)行。
細菌感染所致的感染性疾病占首位;病毒性感染在人群中的發(fā)生率最高,但不一定致??;真菌感染的發(fā)病率近年來(lái)顯著(zhù)上升;寄生蟲(chóng),如隱孢子蟲(chóng)、卡氏肺孢子蟲(chóng)、滴蟲(chóng)等感染開(kāi)始受到普遍關(guān)注。病原體的檢查是臨床確診感染性疾病的主要手段,根據需要鑒定到一定水平即可。例如,作為臨床病原學(xué)診斷,細菌感染只需鑒定到種,必要時(shí)才進(jìn)一步鑒定;若進(jìn)行流行病學(xué)調查,細菌鑒定應達到血清型或基因型。臨床病原體檢查必須通過(guò)采集標本,經(jīng)過(guò)各種試驗后才能明確診斷。標本采集質(zhì)量的好壞直接影響診斷結果,早期采集、無(wú)菌采集、適當與適量采集是確保查明病原體的前提。臨床病原體檢查的方法有多種,包括涂片檢查、分離培養、血清學(xué)鑒定和分子生物學(xué)診斷(molecular biological diagnosis)等,可根據臨床需要和標本類(lèi)型進(jìn)行選擇。臨床標本分離培養的陽(yáng)性結果最具確診意義,但陰性結果并不能完全除外病原體感染的可能。病原體抗原成分檢測可早期、快速診斷感染性疾病,陽(yáng)性結果表明感染病原體的存在。分子生物學(xué)診斷為病原體感染的早期、快速、敏感、特異診斷成為可能,但應排除假陽(yáng)性或假陰性結果。
㈠細菌感染的檢查
1、涂片檢查
臨床標本或分離培養物涂片直接或染色后光學(xué)顯微鏡觀(guān)察,可為進(jìn)一步做生化反應、血清學(xué)鑒定等提供參考依據。通過(guò)顯微鏡觀(guān)察有無(wú)病原體及其大致數量,病原體形態(tài)、染色特征等,可以迅速作出初步診斷,如痰中的抗酸桿菌和腦脊液中的腦膜炎奈瑟菌等。
⑴不染色標本的檢查 不染色標本一般用于觀(guān)察細菌動(dòng)力及運動(dòng)情況,因為不染色標本直接在普通光學(xué)顯微鏡下,不能清楚看到細菌的形態(tài)與結構特征。細菌未染色時(shí)呈無(wú)色透明,在顯微鏡下主要靠細菌的折光率與周?chē)h(huán)境不同進(jìn)行觀(guān)察。有鞭毛的細菌在鏡下呈活潑有方向的運動(dòng),無(wú)鞭毛的細菌則呈不規則布朗運動(dòng)。常用的方法有壓滴法、懸滴法和毛細管法。例如,在高倍暗視野顯微鏡下懸滴米泔樣糞便,觀(guān)察到來(lái)回穿梭似流星樣運動(dòng)的細菌;另制備一標本加入O1群霍亂弧菌診斷血清,若來(lái)回穿梭似流星樣運動(dòng)的細菌停止運動(dòng),為制動(dòng)試驗陽(yáng)性,可報告疑為O1群霍亂弧菌。
⑵染色標本的檢查
細菌標本經(jīng)染色后,與周?chē)h(huán)境在顏色上形成鮮明的對比,可在普通光學(xué)顯微鏡下清楚看到細菌的形態(tài)和某些結構。常用的細菌染色法有:①單染色法 只用一種染料將細菌和周?chē)矬w染成同一種顏色,稱(chēng)為單染色法。如呂氏美藍或稀釋石炭酸復紅染色法。細菌經(jīng)單染色法處理后,可觀(guān)察其形態(tài)與排列、大小及簡(jiǎn)單的結構,但不能顯示細菌染色特性。②復染色法 用兩種或兩種以上的不同染料進(jìn)行染色,可將不同細菌或同一細菌的不同結構染成不同的顏色。本法既可觀(guān)察細菌的形態(tài)結構,還可根據染色反應及著(zhù)色深淺鑒別細菌的種類(lèi),故又稱(chēng)鑒別染色法。常用的有革蘭染色法(Gram stain)和抗酸染色法(acid-fast stain)。 通過(guò)革蘭染色,可將細菌分為革蘭陽(yáng)性(G+)和革蘭陰性(G-)兩大類(lèi),有助于縮小范圍、初步鑒定細菌。例如,在腦脊液涂片中發(fā)現G-的腎形、凹面相對的雙球菌,且在吞噬細胞內或外,則可報告“腦脊液直接涂片找到革蘭陰性雙球菌,形似腦膜炎奈瑟菌”;若發(fā)現有革蘭陽(yáng)性雙球菌,呈矛尖狀、寬端相對尖端向外,且菌體周?chē)星v膜,則可報告“腦脊液直接涂片找到革蘭陽(yáng)性雙球菌,形似肺炎鏈球菌”。
2、分離培養與鑒定 采集臨床標本在選擇性或非選擇性培養基分離培養,觀(guān)察細菌的菌落形態(tài)、生化反應、毒素產(chǎn)生等,并用已知特異性抗體的免疫血清鑒定臨床標本中或分離培養物中未知的細菌,確定致病菌的屬、種和血清型(血清學(xué)鑒定)等。
⑴分離培養:①增菌培養:由于標本中的細菌較少,用人工的方法提供生長(cháng)繁殖所需的營(yíng)養和最適條件,如溫度、濕度和氣體環(huán)境,使其迅速生長(cháng)繁殖,使菌量增多,供進(jìn)一步作純培養或分離致病菌。大部分細菌在24~48h內培養生長(cháng)良好。②分離培養:對于混有多種細菌的臨床標本或其他培養物,經(jīng)過(guò)劃線(xiàn)接種到合適的選擇性或非選擇性固體培養基表面,因劃線(xiàn)的分散作用,使許多原先混雜的細菌在固體培養基表面分離,一般經(jīng)過(guò)18~24h培養后形成由一個(gè)細菌繁殖而來(lái)的細菌集團—菌落(colony),供細菌計數和純培養用。挑選單個(gè)菌落,轉種至另一培養基中,生長(cháng)出來(lái)的細菌均為純種,稱(chēng)為純培養(pure culture)。分離純培養是從臨床標本中檢查鑒定細菌非常重要的第一步,只有先從含有多種雜菌的標本中分離出目的菌純培養,才能進(jìn)一步對目的菌予以鑒定和研究。
⑵鑒定:根據純培養細菌的染色形態(tài)、培養生長(cháng)特性、生化反應和血清學(xué)試驗結果,對分離培養的細菌作出鑒定。目前,大多數臨床細菌實(shí)驗室多借助自動(dòng)化細菌鑒定與藥敏試驗系統,可簡(jiǎn)便、快速、準確地鑒定各種分離培養的細菌,并同時(shí)完成抗菌藥物的敏感性試驗。
3、分子生物學(xué)診斷 PCR技術(shù)直接擴增病原體基因的保守序列,配合DNA探針雜交、DNA序列分析、基因芯片(gene chip)技術(shù)等,檢測臨床標本中或分離培養物中細菌的核酸,可以對感染的細菌作出明確的診斷、分類(lèi)、基因分型和直接檢測耐藥基因等,菌落原位雜交也常用于快速篩選陽(yáng)性克隆。特別是分子生物學(xué)檢測技術(shù)操作的自動(dòng)化分析儀,如自動(dòng)化DNA提取儀,定量PCR儀,DNA序列分析儀,脈沖凝膠電泳儀等,使得病原體的分子生物學(xué)診斷有可能在臨床常規應用
。 ⑴細菌的快速鑒定:幾乎所有致病菌的基因都可直接從標本中進(jìn)行擴增后檢測而不受非致病菌的影響,尤其是對分離培養比較困難的細菌(如結核分枝桿菌)更具特殊意義。目前已用于結核分枝桿菌、沙門(mén)菌、志賀菌、空腸彎曲菌、致病性大腸埃希菌等致病菌的快速鑒定。鑒定各種需氧菌和厭氧菌至種的水平,如鑒別金黃色葡萄球菌、中間葡萄球菌及家畜葡萄球菌,鑒別銅綠假單胞菌、惡臭假單胞菌及熒光假單胞菌,鑒別艱難梭菌、雙酶梭菌及索氏梭菌。
⑵細菌的分類(lèi)鑒定:通過(guò)對兩菌株DNA雜交百分率判斷其同源性,若>70%為高度同源性,基因組差別很??;如果兩菌株DNA雜交百分率<25%為非同源性,兩者不相關(guān)。
⑶細菌毒素的檢測:細菌的特異性毒素基因序列決定所產(chǎn)生毒素的種類(lèi),可用PCR擴增特異的毒素基因片段或直接用其特異性毒素基因探針檢測致病菌的毒素基因,如霍亂腸毒素、金黃色葡萄球菌腸毒素、艱難梭菌毒素等。 ⑷細菌耐藥性檢測:通過(guò)擴增細菌的耐藥基因或直接用耐藥基因的探針檢測標本中或純培養細菌有無(wú)耐藥基因,可以及早了解細菌對某些抗菌藥物的耐藥性或進(jìn)行耐藥性研究,如耐甲氧苯青霉素葡萄球菌的mecA基因、耐β-內酰胺抗生素的TEM型β-內酰胺酶基因。
⑸流行病學(xué)調查:通過(guò)分析流行菌株基因的同源性,可作為流行病學(xué)或醫院感染流行菌株調查的依據。
㈡病毒感染檢查
1、病毒的形態(tài)觀(guān)察:光學(xué)顯微鏡下只能觀(guān)察到大型病毒(如痘病病毒)和病毒感染后人體細胞胞質(zhì)或胞核內出現的包涵體,根據包涵體的特點(diǎn),如巨細胞病毒感染后可在上皮細胞的核內周?chē)@有一輪暈似“貓頭鷹眼”樣的嗜酸性包涵體;電子顯微鏡可直接觀(guān)察到臨床標本或培養物中有特征性的病毒顆粒,如輪狀病毒、皰疹病毒、冠狀病毒等。
2、病毒培養:由于病毒(virus)是專(zhuān)性細胞寄生,需要在活細胞或動(dòng)物體內才能分離培養,一般通過(guò)活組織培養、雞胚接種和動(dòng)物接種,最敏感而特異的方法為雞胚接種。根據培養過(guò)程或動(dòng)物接種后的變化特征、流行病學(xué)資料和標本來(lái)源可進(jìn)行初步鑒定,有助于確定病毒的種類(lèi),但常需結合血清學(xué)試驗鑒定。病毒的分離培養與鑒定比細菌更為復雜,一般實(shí)驗室較少開(kāi)展。
3、病毒抗原檢測:用免疫熒光或免疫酶等技術(shù)檢測標本中的特異性病毒抗原,如血清中的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)等。
4、分子生物學(xué)診斷 ⑴病毒感染的診斷及療效觀(guān)察:檢測病毒核酸的序列或特異基因可確定存在病毒核酸,但是否為有感染性的病毒顆粒則有待進(jìn)一步確認。應用PCR和分子雜交技術(shù)可以直接擴增和分析DNA病毒的特異性片段;RNA病毒則應用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)技術(shù),先逆轉錄為cDNA再行PCR擴增后檢測;定量PCR可對標本中的病毒進(jìn)行量化分析,對病毒感染的診斷和治療觀(guān)察有重要意義。例如,患者血清中檢測到乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)是診斷HBV感染最重要的依據。HBV感染后在檢測到HBV表面抗原(HBsAg)的前2~4周即可查出HBV-DNA,故可診斷HBsAg陰性的HBV感染;通過(guò)定量PCR測定血清中HBV的載量(最低檢出量可達20拷貝/ml),可以觀(guān)察抗病毒療效;急性乙型肝炎時(shí),HBV-DNA先陽(yáng)性,治愈后消失;慢性乙型肝炎時(shí),HBV-DNA常持續存在,病毒載量或高或低。
⑵病毒的基因分型:不同病毒的DNA或RNA均有其特異的序列,同一種病毒的核苷酸組成具有一定的同源性,由此可以對病毒進(jìn)行基因分型。例如:戊型肝炎病毒(HEV)為一種RNA病毒,在全世界發(fā)現的病毒株有7個(gè)主要基因型,各型之間的核苷酸同源性為74%~76%。
⑶流行病學(xué)調查:檢測感染病毒的基因型在不同國家或地區的分布特點(diǎn),有助于分析流行毒株的變化特征。例如,不同地區的HEV基因變異較大,但同一地區的HEV基因序列則相對保守,這對HEV的診斷、研制疫苗、預防感染、臨床治療有重要價(jià)值。
㈢其他病原體感染的檢查
1、真菌感染的檢查
真菌(fungus)為真核細胞微生物,按形態(tài)可分為單細胞和多細胞兩大類(lèi)。單細胞真菌對人體有致病性的主要有新生隱球菌和白念珠菌。多細胞真菌有菌絲(hypha)和孢子(spore),菌絲伸長(cháng)分支并交織成團,又稱(chēng)霉菌。淺部真菌,如皮膚癬菌感染,直接涂片顯微鏡檢查可見(jiàn)菌絲及孢子,可簡(jiǎn)便、快捷地作出初步診斷。真菌的培養要求低、在普通培養基(如沙氏培養基)上能生長(cháng),但真菌繁殖一代時(shí)間較長(cháng),分離培養至少需要4周。根據真菌培養的菌落形態(tài)、菌絲和孢子、染色特點(diǎn)、生化反應可以進(jìn)行鑒定。真菌的抗原檢測可檢查血清和腦脊液中隱球菌、念珠菌及假膜組織胞漿菌感染。分子生物學(xué)診斷在真菌感染的檢查中應用較少,PCR與基因探針技術(shù)聯(lián)合用于卡氏肺孢子菌感染的診斷有一定意義。
2、寄生蟲(chóng)感染的檢查
檢查出寄生蟲(chóng)病原體是確診寄生蟲(chóng)感染性疾病的最直接依據。根據不同種類(lèi)的寄生蟲(chóng)感染人體后的不同發(fā)育階段和寄生部位,采集相應的標本,如血液、糞便、陰道分泌物、骨髓等,涂片檢查蟲(chóng)卵、蟲(chóng)體、包囊等是目前最可靠的確診方法。例如,血涂片檢查瘧原蟲(chóng),糞便涂片檢查各種蠕蟲(chóng)卵、腸道原蟲(chóng)的滋養體和胞囊,陰道分泌物涂片檢查陰道毛滴蟲(chóng)滋養體。部分較大的蟲(chóng)體,如蛔蟲(chóng)、絳蟲(chóng)節片等肉眼可以識別。分離培養極少用,在阿米巴或弓形體感染時(shí)有一定意義。
3、螺旋體感染的檢查
螺旋體(spirochete)是一類(lèi)細長(cháng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運動(dòng)活潑的原核細胞型微生物。臨床標本涂片在暗視野顯微鏡下觀(guān)察到螺旋體的特殊形態(tài)和運動(dòng)狀態(tài)。例如,懷疑為梅毒患者的生殖器分泌物涂片,若暗視野顯微鏡下觀(guān)察到有胞體細長(cháng)、運動(dòng)活潑、由8~14個(gè)密螺旋組成的螺旋體時(shí),有助于梅毒的診斷。除鉤端螺旋體外,其他螺旋不易分離培養,使鑒定較為困難。分子生物學(xué)診斷螺旋體感染有一定意義,用PCR擴增可檢出10條以上的鉤端螺旋體。
4、支原體感染的檢查
支原體(mycoplasma)是一類(lèi)缺乏細胞壁、高度多形性的最小原核細胞型微生物。革蘭染色時(shí)支原體不易著(zhù)色,直接涂片檢查無(wú)臨床診斷意義,一般以分離培養進(jìn)行鑒定。肺炎支原體和解脲脲原體分離培養需10d以上才能長(cháng)出菌落,有時(shí)需20d或更長(cháng),不適合臨床快速診斷。PCR結合核酸雜交試驗與序列分析,可以敏感、快速診斷各類(lèi)支原體感染。
5、衣原體感染的檢查
衣原體(chlamydia)是一類(lèi)專(zhuān)性細胞內寄生的原核細胞型微生物,主要包括沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、肺炎衣原體。涂片檢查可在被感染細胞的細胞質(zhì)內查到包涵體,具有一定的診斷價(jià)值。免疫熒光染色檢查被感染細胞內的衣原體抗原,可以快速診斷衣原體感染和分型。
6、立克次體感染的檢查
立克次體(rickettsia)是一類(lèi)微小的桿狀或球桿狀的、除極少數外僅在宿主細胞內繁殖的微生物。免疫熒光染色可檢查被感染組織標本中的立克次體抗原,PCR擴增產(chǎn)物分析可以敏感、早期診斷立克次體感染。
感染性疾病是臨床的常見(jiàn)病,重癥感染有較高的病死率。正確的標本采集、分離培養與鑒定,及時(shí)、快速、準確地檢出病原體,對感染的早期診斷和治療等有重要的臨床意義。
㈠血液與循環(huán)系統感染的檢查
1、適應癥
原發(fā)性血液及循環(huán)系統病原體感染較少,臨床上多繼發(fā)于其他疾病而致菌血癥或膿毒血癥、細菌性心內膜炎、心包炎、化膿性骨髓炎等。當遇患者有下列臨床表現、疾病或做有關(guān)治療時(shí)應考慮作血液或骨髓液的病原體檢查。 ⑴血液與循環(huán)系統感染的癥狀:不明原因的發(fā)熱、皮疹、肝脾腫大、關(guān)節痛、神志昏迷、休克等。
⑵血液與循環(huán)系統感染性疾?。杭毦孕膬饶ぱ?、化膿性骨髓炎等。
⑶易導致血液與循環(huán)系統感染的疾?。杭甭园籽?、再生障礙性貧血、粒細胞減少癥或缺乏癥、淋巴瘤、骨髓瘤等血液系統病,化膿性疾病、粘膜損傷性疾病、肝臟疾病繼發(fā)感染、糖尿病繼發(fā)感染、艾滋病、呼吸道感染及呼吸衰竭等。
⑷長(cháng)期輸液或導管介入治療的疾病、血液透析、骨髓移植等。
2、標本采集
⑴在病人使用抗菌藥物之前, 發(fā)熱初期或高峰時(shí)或發(fā)熱前半小時(shí)采血。對已經(jīng)使用抗菌藥物治療而又不能停藥的患者,為了分離出病原菌應該重復采血數次。
⑵病人在24小時(shí)內,應從不同部位采血3次。急性細菌性心內膜炎病人, 每次采血間隔1~2h以上,亞急性細菌性心內膜炎病人, 每次間隔≥15min。
⑶采血部位為肘靜脈。疑為細菌性心內膜炎時(shí),可從肘動(dòng)脈或股動(dòng)脈采血。
⑷采血部位的局部皮膚應嚴格消毒,避免皮膚正常菌群污染。
⑸血液注入培養瓶之前,應注意消毒培養瓶蓋。
⑹將血液注入培養瓶后應輕輕搖動(dòng),使其與液體培養基混合,避免出現血凝塊。
⑺成人每次采血為8~10ml,嬰幼兒為1~3ml。
⑻血液培養基的選擇:①實(shí)驗室自制的血培養基。②商品化培養基有需氧菌、厭氧菌、真菌和兒童血培養瓶,還有雙相培養瓶(培養瓶?jì)群幸后w和固體兩種培養基)等血培養系統。為提高培養陽(yáng)性率最好同時(shí)作需氧菌和厭氧菌雙瓶血培養。③懷疑L型細菌感染時(shí),選用高滲血培養基。
⑼采血后應盡快送檢,否則暫放室溫。
3、常見(jiàn)感染病原體的檢查
⑴增菌培養:①自動(dòng)化血培養系統:以Bactec 9000培養系統為例,每間隔10分鐘自動(dòng)檢測1次血培養瓶,有細菌生長(cháng)則自動(dòng)報告陽(yáng)性。血瓶培養5~7d時(shí),若無(wú)細菌生長(cháng),則自動(dòng)報告陰性。對特殊細菌或真菌可延長(cháng)培養時(shí)間。自動(dòng)化血培養系統具有快速檢出和提高血培養陽(yáng)性率等優(yōu)點(diǎn),檢出時(shí)間的快慢取決于血瓶中細菌的種類(lèi)和細菌的數量,最快陽(yáng)性檢出時(shí)間為1.5h,48小時(shí)陽(yáng)性檢出率為80%~90%。②目測法:每日用肉眼觀(guān)察培養瓶有無(wú)細菌生長(cháng)跡象,并定期轉種培養基。若血培養基中有菌生長(cháng),則進(jìn)一步作分離培養、鑒定或抗菌藥物敏感試驗。
⑵分離培養與鑒定
①需氧菌/兼性厭氧菌:需氧菌血培養瓶有細菌生長(cháng)時(shí),以無(wú)菌方法用注射器抽取培養液。培養液直接涂片、革蘭染色鏡檢,根據菌體的染色和形態(tài)特點(diǎn),可以初步報告結果。將培養液轉種血平板和選擇培養基上,空氣中35℃培養。用常規方法或自動(dòng)化細菌鑒定系統鑒定細菌,必要時(shí)用血清學(xué)試驗鑒定細菌。
②厭氧菌:厭氧菌培養瓶有細菌生長(cháng)時(shí),轉種培養液在厭氧菌培養基上,在無(wú)氧環(huán)境中35℃培養48~72h。同時(shí)也將培養液轉種在血平板上,置空氣中35℃培養。根據菌落生長(cháng)特點(diǎn)、革蘭染色、菌體形態(tài)、耐氧試驗和生化反應鑒定厭氧菌。臨床常見(jiàn)厭氧菌有類(lèi)桿菌群細菌如脆弱類(lèi)桿菌、艾格斯類(lèi)桿菌等。
③真菌:培養瓶有真菌生長(cháng)時(shí),直接用培養液涂片鏡檢,高倍鏡下見(jiàn)到圓形、橢圓形芽生孢子或假菌絲體,可初步報告有酵母樣真菌生長(cháng)。同時(shí)轉種于沙氏培養基培養,白念珠菌生長(cháng)比較快,在培養基上有乳白色或奶油色菌落生長(cháng),根據鏡下形態(tài),芽管形成試驗和生化試驗鑒定。常見(jiàn)菌為白念珠菌。
4、其它感染病原體的檢查
⑴瘧原蟲(chóng)(Plasmodium):用末稍血制薄血片或厚血片,進(jìn)行瑞氏染色鏡檢,在紅細胞內可找到環(huán)狀體、滋養體或排列不規則的裂殖體。
⑵杜氏利什曼原蟲(chóng)(Leishmania donovani):肝、脾、骨髓穿刺液涂片、血涂片瑞氏染色鏡檢,可見(jiàn)到在巨噬細胞內或散在分布的圓形或卵圓形的無(wú)鞭毛蟲(chóng)體(又稱(chēng)LD小體)。
⑶微絲蚴(Microfilaria):一般在夜間采血,可采用試管濃集法或制厚血片姬姆薩染色鏡檢。新鮮血涂片中可見(jiàn)到似蚯蚓樣活動(dòng)的微絲蚴,馬來(lái)微絲蚴有尾核,斑氏微絲蚴無(wú)尾核。
⑷回歸熱螺旋體(Borrelia recurrentis):制薄血片或厚血片,姬姆薩或瑞氏染色鏡檢,紅細胞空隙間見(jiàn)到疏螺旋體,或用1滴新鮮外周血在暗視野顯微鏡下見(jiàn)到活動(dòng)的螺旋體。
5、臨床意義
⑴菌血癥與膿毒血癥
健康人血液與骨髓液中無(wú)細菌、病毒、寄生蟲(chóng)等病原體,當少量細菌侵入血液后,若為一過(guò)性或持續存在、不繁殖或繁殖很少,不引起或僅引起輕微的炎癥反應,稱(chēng)為菌血癥(bacteremia);此外,還可出現病毒血癥(virumia)、真菌血癥(fungemia)等。如果病原菌及其毒素侵入血流引起全身性炎癥反應并出現臨床癥候群,如高熱、寒戰、呼吸急促、神志異常等,嚴重者引起休克、DIC和多臟器功能衰竭等,稱(chēng)為膿毒血癥(sepsis)或敗血癥(septicemia)。血液與循環(huán)系統的感染嚴重危及病人的生命。重癥感染病人、外科手術(shù)和免疫功能低下病人容易發(fā)生菌血癥或膿毒血癥。美國每年大約有30萬(wàn)~50萬(wàn)菌血癥病人,病死率為20%~30%。我國不同地區和不同醫院的發(fā)生率不同,原發(fā)性菌血癥一般在15%左右。
菌血癥或膿毒血癥主要由需氧菌或兼性厭氧菌感染引起,如果是由產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、及耐萬(wàn)古霉素的腸球菌(VRE)、產(chǎn)金屬酶的銅綠假單胞菌等難以治療的細菌引起的感染,病死率較高。厭氧菌可以引起單獨感染或與需氧菌同時(shí)感染。真菌血癥常發(fā)生于二重感染。
⑵常見(jiàn)菌血癥與膿毒血癥
①常見(jiàn)的病原體(見(jiàn)表3-1-1)
表3-1-1常見(jiàn)菌血癥與膿毒血癥的病原體
種類(lèi) 病原體
革蘭陽(yáng)性細菌 金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、其他凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、結核分支桿菌
革蘭陰性細菌 大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、傷寒沙門(mén)菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、嗜肺軍團菌
厭氧菌 類(lèi)桿菌群細菌如脆弱類(lèi)桿菌、艾格斯類(lèi)桿菌,產(chǎn)氣莢膜梭菌
真菌 白念珠菌、新生隱球菌
②革蘭陽(yáng)性球菌血癥
MRSA及凝固酶陰性葡萄球菌:引起菌血癥和膿毒血癥較多,約占菌血癥的10%~15%;常因原發(fā)病灶(如膿腫、癰等)繼發(fā)感染或呼吸道感染所致。
腸球菌:常因泌尿系感染、消化道和腹腔感染等繼發(fā),約占菌血癥的10%左右。這兩類(lèi)細菌感染的患者發(fā)病急重,可并發(fā)心內膜炎,而且易對多種抗菌藥物產(chǎn)生耐藥。
③革蘭陰性桿菌血癥:常見(jiàn)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌等,多為免疫功能低下患者的繼發(fā)感染所致。
④醫院感染所致菌血癥:主要見(jiàn)于重癥監護病房的各類(lèi)重癥患者,惡性腫瘤放化療、器官移植等免疫抑制劑藥物使用者,各類(lèi)插管、氣管切開(kāi)、血液透析等治療患者,患者常為耐藥菌嚴重感染、多重感染,而且易繼發(fā)真菌感染,約占菌血癥的30%~60%。
⑶寄生蟲(chóng)感染
①瘧原蟲(chóng)為瘧疾的病原體,我國多見(jiàn)間日瘧和惡性瘧,表現周期性的寒戰發(fā)熱、出汗退熱緩解,日久可出現肝脾腫大。
②絲蟲(chóng)病急性期為淋巴管、淋巴結炎等,慢性期臨床表現為象皮腫、乳糜尿、睪丸鞘膜積液等。
③螺旋體感染:回歸熱螺旋體引起急性傳染病回歸熱?;貧w熱螺旋體在血中大量出現時(shí)病人發(fā)高燒、頭痛、肝脾腫大。數天退熱后,血中螺旋體消失,可如此反復發(fā)作多次。
④杜氏利什曼原蟲(chóng)是黑熱病的病原體,導致肝、脾、淋巴腫大,出現貧血、蛋白尿、血尿等。
㈡泌尿生殖系統感染的檢查
1、適應癥
⑴泌尿生殖系統感染的癥狀:發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難、血尿、膿尿、腰痛、尿道或陰道分泌物增多、陰道分泌物異常、會(huì )陰部疼痛、陰囊或陰道疼痛、下腹疼痛等。
⑵泌尿生殖系統感染性疾?。杭毙阅虻姥?、膀胱炎、輸尿管炎、腎盂腎炎、腎結核、腎膿腫、腎結石或膀胱結石、前庭大腺膿腫、外陰或陰道念珠菌病、細菌性陰道病、急性子宮炎、急性盆腔炎、羊膜腔感染、前列腺炎、前列腺增生等。
2、標本采集
⑴尿液標本
在應用抗菌藥物之前或停藥1~2天后采集標本,最好采集清晨第一次尿液或者采集在膀胱內貯留6~8h的尿液。
① 中段尿液采集法:女性采樣前應先用肥皂水或0.1%高錳酸鉀水溶液沖洗外陰部及尿道口;男性需翻轉包皮沖洗,用0.1% 新潔爾滅消毒尿道口,滅菌紗布拭干,用無(wú)菌廣口瓶收集中段尿5ml~10ml。
② 導尿采集法:采集導尿管的尿5~10ml于無(wú)菌容器中。該方法可以減少污染,但多次重復導尿可造成逆行感染。采集留置導尿管的尿液時(shí)應先消毒尿管接口周?chē)?,然后解開(kāi)接口,棄去尿管部分的尿液,收集膀胱內尿液5ml~10ml。
③ 膀胱穿刺法:用于厭氧菌培養或留取尿標本困難的病人,可經(jīng)恥骨聯(lián)合上穿刺膀胱采集尿液。
④ 尿標本采集后應立即送檢,否則,4℃冰箱暫時(shí)保存。若疑為淋病奈瑟菌感染,應立即接種,不能放冰箱保存。
⑵生殖道標本
①子宮內分泌物:用防污染的無(wú)菌采樣器采集標本,避免陰道和宮頸口的正常菌群污染。
②女性盆腔膿腫:以無(wú)菌的方法用無(wú)菌注射器從子宮直腸凹陷處抽取膿液。
③前列腺液:急性前列腺炎忌作按摩,以防細菌擴散。慢性前列腺炎時(shí)可按摩前列腺收集標本或用前列腺活檢組織做病原菌培養,標本采集前一定要注意清潔尿道口,避免正常菌群污染。
2、常見(jiàn)病原體的檢查
⑴直接涂片檢查
①細菌:用未離心的新鮮尿液,充分混勻后直接涂片,革蘭染色后油鏡檢查,平均每個(gè)視野細菌計數≥1個(gè)為涂片陽(yáng)性,相當于尿培養細菌計數≥105CFU/ml,敏感度可達90%以上,但此方法實(shí)際應用不多。
②真菌:直接用高倍鏡檢查尿液或陰道分泌物,見(jiàn)到圓形或橢圓形孢子、出芽孢子及假菌絲體為陽(yáng)性。
③結核分枝桿菌(M. tuberculosis):取高壓滅菌后的晨尿離心沉淀物厚涂片,抗酸染色鏡檢。見(jiàn)到菌體呈紅色、略帶彎曲,有時(shí)呈分枝狀的桿菌,可報告見(jiàn)到抗酸桿菌。此外,還可以用子宮內膜刮出物、宮頸組織,前列腺液等直接涂片檢查結核分枝桿菌。
⑵分離培養與鑒定
①尿液定量細菌培養:為了確診泌尿道感染(urinary tract infection, UTI),需做尿液定量細菌培養(結核分枝桿菌例外)。用1?l定量接種環(huán)或加樣器取尿液接種在血平板和麥康凱平板上,空氣中35℃培養24h~48h,若有細菌生長(cháng),計算1ml尿液中菌落數(colony formation units,CFU)并鑒定細菌。如果48h不生長(cháng)細菌,則報告無(wú)細菌生長(cháng)。
②生殖道標本和前列腺液細菌培養:將標本接種在血平板和麥康凱平板上,空氣中35℃培養24~ 48h,有細菌生長(cháng),采用常規方法或自動(dòng)化細菌鑒定系統等方法鑒定。懷疑宮腔膿腫有厭氧菌感染時(shí)應做厭氧菌分離培養和鑒定。
③結核分枝桿菌培養:尿液離心沉淀物經(jīng)處理后,接種于改良羅氏培養基或結核菌自動(dòng)化培養系統的培養基、MGIT培養管中分別培養。改良羅氏培養基上需培養6~8周,生長(cháng)的菌落呈凸起、奶酪色、不透明、粗燥型,菌體抗酸染色陽(yáng)性。自動(dòng)化培養系統能快速檢測結核菌生長(cháng)。對培養出的抗酸桿菌可采用常規法或基因檢測等方法鑒定。
4、臨床意義
⑴細菌感染:尿液定量細菌計數是作為泌尿道感染診斷的依據,當清潔中段尿或導尿(非留置導尿)革蘭陰性桿菌計數≥105CFU/ml、革蘭陽(yáng)性球菌≥104CFU/ml、恥骨聯(lián)合上膀胱穿刺留取尿液培養細菌數≥103CFU/ml時(shí),有對泌尿系感染有診斷意義。由于抗菌藥物治療或用快速利尿劑等因素影響,細菌計數可能在103~104CFU/ml之間。根據細菌計數并結合病人臨床癥狀進(jìn)行診斷和治療用藥。細菌感染引起的臨床常見(jiàn)病包括急慢性尿道炎、膀胱炎、輸尿管炎、腎盂腎炎、前列腺炎、睪丸炎等,重者可引起盆腔膿腫、腎膿腫。在感染的細菌中大腸埃希菌為最常見(jiàn)菌,其中產(chǎn)ESBLs菌株增加;腸球菌的感染僅次于大腸埃希菌,糞腸球菌和屎腸球菌的總感染率占腸球菌的90%以上。屎腸球菌較糞腸球菌耐藥率高。高耐氨基糖甙類(lèi)抗生素腸球菌有增加趨勢,糞腸球菌對慶大霉素高水平耐藥率為40.2%~56%左右,屎腸球菌為48.5%~67.50%左右。耐萬(wàn)古霉素腸球菌在我國的耐藥率為2.2%~3.8%。結核分枝桿菌可引起腎結核及女性盆腔結核,男性附睪、精囊和前列腺結核等。
⑵真菌感染:由于臨床對重癥感染病人的治療中大量、長(cháng)時(shí)間使用廣譜抗菌藥物,導致真菌二重感染,真菌性尿道炎有所增多。此外,念珠菌被視為性病的病原體,常引起外陰、陰道念珠菌病,臨床表現為外陰瘙癢、陰道內疼痛、陰道分泌物增多、呈豆腐渣樣。常見(jiàn)感染的真菌為白念珠菌。
⑶泌尿生殖系統感染的常見(jiàn)病原體
此部分主要涉及細菌和真菌感染,其它病原體感染的檢查見(jiàn)第四節:性傳播疾病的實(shí)驗診斷。
泌尿生殖系統感染的常見(jiàn)病原體
種類(lèi) 常見(jiàn)病原體
革蘭陰性細菌 大腸埃希菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌、克雷伯菌、陰溝腸桿菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌等
革蘭陽(yáng)性細菌 糞腸球菌、屎腸球菌、甲型溶血性鏈球菌、表皮葡萄球菌、結核分支桿菌等
厭氧菌 類(lèi)桿菌屬細菌
真菌 白念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌
㈢呼吸系統感染的檢查
1、適應癥
⑴呼吸系統感染的癥狀:發(fā)熱、咳嗽、痰多(如泡沫血痰、鐵銹色痰、膿痰)、咯血、呼吸困難等。
⑵呼吸系統感染性疾?。罕歉]炎、咽炎、扁桃體炎、支氣管炎、肺炎、肺膿腫、肺結核、猩紅熱、百日咳、白喉等。
2、標本采集
呼吸道標本應該在抗菌藥物應用之前采集,采集過(guò)程中盡量避免口腔正常菌群的污染。標本采集后立即送檢,避免少量污染細菌過(guò)度生長(cháng)。若不能及時(shí)送檢的標本暫放4℃冰箱,若分離培養肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌,不能放4℃冰箱。
⑴咽拭子采集法:用棉拭子采集病人咽后壁或懸雍垂的后側,反復涂抹數次;采集白喉標本時(shí)要擦拭咽、鼻粘膜、偽膜部分和深層組織的分泌物,并立即送檢。
⑵鼻咽拭子采集法:鼻咽拭子是一端彎曲的金屬棉拭子(有商品),經(jīng)鼻腔進(jìn)入鼻咽部采集標本,置于運送培養基送檢。
⑶鼻咽管采集法:用細鼻飼管從鼻腔進(jìn)入到鼻咽部,用負壓吸引器吸取鼻咽部分泌物并放入無(wú)菌容器內送檢。用于病毒培養的標本,最好在床邊接種,否則放冰壺內立即送檢。
⑷痰液標本采集法
①咳痰:病人晨起用清水漱口數次,以便將口腔內正常菌群漱出。指導病人用力咳出呼吸道深部的痰液,置無(wú)菌容器中送檢。痰量少者可采用加溫45℃左右的10%氯化鈉溶液霧化吸入,使痰液容易排出。
②吸痰管吸痰:對嚴重感染而又無(wú)力咳痰或昏迷病人可采用吸痰管吸痰。
③用防污染纖維支氣管鏡刷直接取得痰液或采集肺泡灌洗液,放置無(wú)菌容器中。
④氣管穿刺法:懷疑厭氧菌引起的肺部感染,可通過(guò)氣管穿刺取得痰液。
3、常見(jiàn)病原體的檢查
⑴直接涂片檢查
①痰液細胞檢查:挑取膿性痰液加蓋玻片,在低倍鏡下計數白細胞和鱗狀上皮細胞的數量,每個(gè)視野多形核白細胞≥25個(gè),鱗狀上皮細胞<10個(gè),表明是下呼吸道的感染標本,適合做細菌培養。軍團菌和結核菌培養不受此影響。
②肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumonia ):痰液直接涂片、革蘭染色鏡檢,見(jiàn)到革蘭陽(yáng)性雙球菌,呈矛頭狀排列,有的帶有莢膜,結合臨床可初步診斷。
③結核分枝桿菌:高壓滅菌后挑取痰液在潔凈無(wú)劃痕玻片上均勻涂片、厚度適宜,進(jìn)行抗酸染色,油鏡檢查見(jiàn)到抗酸染色陽(yáng)性及形態(tài)特點(diǎn)似結核菌時(shí),報告“找到抗酸桿菌”。
④白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheriae):將分泌物涂片,采用Neisser或Albert法染色,鏡下見(jiàn)到革蘭陽(yáng)性桿菌,排列不規則,呈V、Y及柵欄狀排列,有明顯異染顆粒,可報告見(jiàn)到革蘭陽(yáng)性棒狀桿菌。
⑵分離培養與鑒定
①定量細菌培養:對痰標本或肺泡灌洗液進(jìn)行定量細菌培養,計算每毫升中不同種類(lèi)的細菌數(CFU/ml),并鑒定細菌。
②肺炎鏈球菌:肺炎鏈球菌在血平板上菌落為扁平、表面光滑、周?chē)胁菥G色溶血環(huán),有的菌落中央塌陷,呈臍窩狀。該菌膽汁溶菌試驗陽(yáng)性、發(fā)酵菊糖、Optochin敏感試驗陽(yáng)性,小白鼠毒力試驗陽(yáng)性等。
③流感嗜血桿菌(Heamophilus influenzae):將標本接種在巧克力選擇瓊脂平板上,放置含5%~10%CO2環(huán)境培養。細菌與金黃色葡萄球菌一起培養時(shí)有“衛星現象”(satellite phenomenon)。菌體為多形性革蘭陰性小桿菌。根據生長(cháng)需要X、V因子、生化反應鑒定細菌。
④軍團菌(Legionella):標本接種在活性炭酵母浸膏培養基上(BCYE)培養,只能在BCYE培養基上生長(cháng)的革蘭陰性桿菌(不易著(zhù)色),結合生化反應和血清學(xué)分型鑒定細菌。
⑤結核分枝桿菌:痰液或支氣管肺泡灌洗液經(jīng)處理雜菌后接種培養。(與尿結核菌培養方法相同)。
⑥肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia):肺炎支原體對營(yíng)養要求比較高,培養基中需加入小牛血清和新鮮酵母液等。將采集的咽拭子標本、支氣管分泌物、鼻咽洗液、痰等標本接種于液體和固體選擇培養基中培養1~2周,結合菌落生長(cháng)特性和生化反應鑒定。因肺炎支原體培養時(shí)間長(cháng)而且陽(yáng)性率很低,臨床常采用血清學(xué)或分子生物學(xué)方法檢測。
⑦肺炎衣原體和呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒等不同病毒需選擇不同的敏感細胞株進(jìn)行培養。
4、臨床意義
⑴病毒感染:流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和冠狀病毒等為呼吸道感染的常見(jiàn)病毒,免疫功能低下者如嬰幼兒、老年人、癌癥患者、器官移植病人等易發(fā)生感染。引起嚴重急性呼吸綜合征(SARS)的新型冠狀病毒在2003年的流行中,中青年感染者居多。不同種類(lèi)病毒引起的臨床表現和造成的嚴重程度不同,如較重者患有急性和慢性支氣管炎、毛細支氣管炎和急性肺炎。甲型流感病毒易發(fā)生變異,新變異株除散發(fā)流感外,還引起爆發(fā)流行。近年,巨細胞病毒(CMV)引起的肺炎有增加趨勢。病毒性肺炎嚴重者發(fā)生死亡。
⑵細菌感染:下呼吸道細菌感染是導致病人死亡的一個(gè)主要原因。臨床常見(jiàn)感染有急性和慢性氣管炎、支氣管炎、肺炎、肺膿腫、胸腔膿腫、肺結核病等。常見(jiàn)感染細菌有肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、卡他布蘭漢菌、銅綠假單胞菌、產(chǎn)ESBL大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌、流感嗜血桿菌等。肺膿腫常常伴有厭氧菌感染,偶見(jiàn)奴卡菌或放線(xiàn)菌感染。嗜肺軍團菌肺炎及其小型爆發(fā),國內有不少報道。近年,結核病有回升趨勢,而且結核分枝桿菌多重耐藥菌株也不斷增加,全球每天約有8000人死于結核病,世界衛生組織已將結核病作為重點(diǎn)控制的傳染病之一。此外,非結核分枝桿菌感染有增多趨勢。白喉棒狀桿菌引起傳染病白喉(diphtheria),細菌在咽部粘膜上繁殖,形成白色偽膜,繼而發(fā)生在喉部或氣管內,容易造成窒息死亡。目前,該病幾乎絕跡。
由于病人自然咳出的痰容易被口腔正常菌群污染,痰培養生長(cháng)的細菌,有時(shí)難以評價(jià)是否有臨床意義,通過(guò)對痰質(zhì)量的評定和定量細菌培養,尚有一定的參考價(jià)值。當痰細菌計數≥106CFU/ml或經(jīng)纖維支氣管鏡、人工氣道吸引采集的下呼吸道分泌物細菌計數≥105CFU/ml、支氣管肺泡灌洗液細菌計數≥104CFU/ml和防污染支氣管肺泡灌洗液(PBAL)細菌計數≥103CFU/ml時(shí),具有臨床診斷意義。
⑶真菌感染:免疫功能低下者如白血病病人和其他長(cháng)期應用抗菌素治療的重癥病人,容易引起真菌性肺炎。病原真菌常以白念珠菌為主,其他可見(jiàn)曲霉菌、毛霉菌、組織胞漿菌等。AIDS患者易發(fā)生卡氏肺孢子菌(pneumocystis carinii)感染。
⑷支原體感染:肺炎支原體是人類(lèi)原發(fā)性非典型肺炎(primary atypical pneumoniae, PAP)的主要病原體之一,肺炎支原體主要經(jīng)飛沫傳播,可導致疾病的流行,兒童及青少年多見(jiàn)發(fā)病。
⑸衣原體感染:肺炎衣原體(Chlamydia pneumonia)在人之間通過(guò)飛沫傳播,引起支氣管炎、肺炎等,兒童和青少年容易感染,感染率為10%左右。我國成人肺炎衣原體抗體陽(yáng)性率高達50%左右。鸚鵡熱衣原體肺炎是由于人接觸鳥(niǎo)類(lèi)而感染。新生兒沙眼衣原體肺炎多因其在分娩過(guò)程中感染所致。
㈣消化系統感染的檢查
1、適應癥
⑴消化系統感染的癥狀:急慢性腹瀉、粘液便或膿血便,無(wú)痛性水樣便或米泔水樣便,長(cháng)期抗生素治療后排稀糊狀便、排便次數多,嬰幼兒腹瀉伴高熱驚厥等
⑵消化系統感染性疾?。杭毦粤〖?、細菌性食物中毒、消化道潰瘍、胃腸炎、感染性腹瀉等。
2、標本采集
標本采集最好在使用抗菌素之前,采集后及時(shí)送檢。
⑴胃粘膜組織采集:用胃鏡采集胃竇、胃體等多部位的胃粘膜病變組織后立即放入20%葡萄糖溶液中送檢。
⑵糞便標本采集:采集發(fā)病早期帶有膿血和粘液部分的糞便,稀水樣糞便應選擇含有絮狀物的部分,盛于無(wú)菌小瓶中及時(shí)送檢。對難以自然留取糞便者,可選用直腸采便器,用甘油鹽水或生理鹽水先濕潤插入端,然后插入肛門(mén)4~5cm處,輕輕旋轉采便器采集標本,取出后放入無(wú)菌容器中,若不能及時(shí)送檢,應將標本放在卡-布(Cary-Blair)運送培養基中送檢。
⑶食物中毒標本采集:可疑食物、患者嘔吐物、胃液等,盛于無(wú)菌小瓶中及時(shí)送檢
3、常見(jiàn)病原體的檢查
⑴直接涂片檢查
① 糞便菌群觀(guān)察:取糞便直接涂片、革蘭染色。油鏡下見(jiàn)到革蘭陰性桿菌、革蘭陽(yáng)性球菌、革蘭陽(yáng)性桿菌或酵母菌等不同菌群的數量,可初步觀(guān)察球菌與桿菌的比例(球桿菌比)并報告結果。
② 水樣便直接鏡檢:用壓滴法或懸滴法觀(guān)察細菌的動(dòng)力,在暗視野顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下見(jiàn)到來(lái)回穿梭似流星樣運動(dòng)的細菌,并用霍亂弧菌抗血清做制動(dòng)試驗,若為陽(yáng)性,報告可疑為霍亂弧菌。
③ 幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori ,HP)檢查:采集的胃粘膜組織經(jīng)研磨后,直接涂片、革蘭染色,在油鏡下見(jiàn)到革蘭陰性彎曲桿菌,呈S形或海鷗展翅樣排列。
④ 糞便直接涂片法檢查蟲(chóng)卵或滋養體:為提高陽(yáng)性率可采用改良加藤法檢查腸道蠕蟲(chóng)卵;用碘液直接涂片法檢查原蟲(chóng)包囊;透明膠紙肛周拭擦法檢查蟯蟲(chóng)卵。阿米巴痢疾的糞便呈醬紅色,鏡檢觀(guān)察大滋養體時(shí),糞便必須新鮮才能見(jiàn)到活動(dòng)的滋養體。糞便中的靈芝孢子與蟲(chóng)卵極為相似,應注意區別。
⑵脲酶試驗(urease test):將采集的胃粘膜組織塊放入含有20%尿素培養液內,觀(guān)察數分鐘,培養液很快由黃色變?yōu)榧t色,提示幽門(mén)螺桿菌中的脲酶分解尿素為陽(yáng)性,培養液不變色為陰性。
⑶分離培養與鑒定
① 幽門(mén)螺桿菌: 將研磨后的胃粘膜組織標本,接種在幽門(mén)螺桿菌選擇培養基上,在微需氧環(huán)境中培養48~72h,根據細菌的典型特點(diǎn)及生化反應鑒定。
② 致瀉性大腸埃希菌:將糞便或嘔吐物接種在腸道菌選擇培養上培養。細菌初步鑒定為大腸埃希菌后,分別與5種不同型的診斷血清做凝集試驗以確定血清型,包括腸毒素型大腸埃希菌(enterotoxigenic E. coli, ETEC)、腸致病性大腸埃希菌(enteropathogenic E. coli, EPEC)、腸侵襲型大腸埃希菌(enteroinvasive E. coli, EIEC)、腸出血型大腸埃希菌(enterohemorrhagic E. coli, EHEC)、腸凝聚型大腸埃希菌(enteroaggregative E. coli, EAggEC),EHEC中常見(jiàn)的血清型為O157:H7
③ 沙門(mén)菌(Salmonella): 取糞便或肛拭標本、嘔吐物等接種在SS等選擇培養基上培養。挑選可疑菌落做生化試驗,當生化反應符合沙門(mén)菌的特性時(shí),用沙門(mén)菌的抗血清做鑒定和分型。
④ 志賀菌(Shigella):挑取糞便中膿血、粘液部分接種在SS等選擇培養基上培養,挑選可疑菌落做生化試驗,當生化反應符合志賀菌的特性時(shí),用志賀菌的抗血清做鑒定和分型。
⑤ 霍亂弧菌(vibrio cholera):取水樣糞便或嘔吐物接種于選擇培養基中增菌及直接培養。用生長(cháng)的可疑菌落涂片鏡檢并與O1群多價(jià)血清及O139型血清作凝集試驗,確定血清群。同時(shí)做生化試驗鑒定。
⑥ 空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni):糞便或肛拭子標本直接接種在選擇培養基上,42℃微需氧培養。根據菌體特點(diǎn)及生化反應鑒定細菌。
4、臨床意義
⑴腸道菌群失調癥(intestinal dysbacteriosis):健康成年人糞便中有較多的常駐細菌(又稱(chēng)正常菌群),主要包括大腸埃希菌、腸球菌、厭氧菌等,約占80%左右,另有少數產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌等多為過(guò)路菌,一般不超過(guò)10%。嬰兒糞便中主要為雙歧桿菌等。正常糞便中革蘭染色陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌的比例(簡(jiǎn)稱(chēng)球桿菌比)約為1:10。常駐細菌的相對穩定對維持腸道的生理環(huán)境有重要的意義。一些慢性消耗性疾病、惡性腫瘤,尤其是應用長(cháng)期使用各種抗生素和免疫抑制劑的病人,正常菌群減少或消失,葡萄球菌等明顯增多球桿菌比值增大,常發(fā)生其他致病菌(如艱難梭菌等)或真菌感染(常見(jiàn)假絲酵母菌),可導致偽膜性腸炎等,臨床稱(chēng)為腸道菌群失調癥,近年來(lái)發(fā)病率呈逐漸上升趨勢。對長(cháng)期應用抗菌素治療的病人應動(dòng)態(tài)監測腸道菌群的變化,及時(shí)發(fā)現菌群失調癥和調整治療方案。
⑵細菌感染
①幽門(mén)螺桿菌(HP)感染:主要引起的慢性活動(dòng)性胃炎、萎縮性胃炎、胃及十二指腸消化性潰瘍等,某種基因型(cagA基因陽(yáng)性菌株)可能與胃癌的發(fā)生有關(guān)。
②志賀菌感染:引起急性和慢性痢疾,我國以福氏志賀菌感染多見(jiàn),病人有腹痛、發(fā)熱、膿血便。兒童中毒性痢疾較多見(jiàn),搶救不及時(shí)易造成病人死亡。多數痢疾為散發(fā),也可以通過(guò)人與人之間傳播,或偶因飲用污染水源或食物引起暴發(fā)流行。
③沙門(mén)菌感染:引起胃腸炎,病人臨床表現為腹瀉,伴有惡心和嘔吐。鼠傷寒沙門(mén)菌常引起嬰幼兒腹瀉,也可因醫源性感染造成小型暴發(fā)。
④ O1群和O139型霍亂弧菌感染:是引起烈性腸道傳染病霍亂的病原菌。O1群霍亂弧菌引起全世界霍亂多次大流行,造成許多人死亡, O139型霍亂弧菌是近年新發(fā)現的血清型。
⑤致瀉性大腸埃希菌中腸致病型大腸埃希菌(EPEC)常引起嬰幼兒腹瀉。腸出血型大腸埃希菌(EHEC)可發(fā)生暴發(fā)流行,有癥狀者出現腹瀉和血便,無(wú)明顯發(fā)熱或低熱,其中O157:H7血清型能并發(fā)溶血性尿毒癥(HUS),發(fā)生溶血性貧血、血小板減少和急性腎功能衰竭,導致病人死亡。產(chǎn)腸毒素型大腸埃希菌(ETEC)引起旅游者腹瀉。腸侵襲型大腸埃希菌(EIEC)引起的腹瀉,有膿血、粘液便、病人有發(fā)熱和腹痛等癥狀。腸聚集型大腸埃希菌(EAggEC)在兒童腸道感染中多見(jiàn)。
⑥空腸彎曲菌感染:主要引起成人和兒童急性腸炎,國外報道較多。
⑦產(chǎn)腸毒素脆弱類(lèi)桿菌感染:近年來(lái)國外報道能引起成人和兒童腹瀉。
⑵真菌感染:常見(jiàn)抗生素相關(guān)性真菌腹瀉,以假絲酵母菌感染為主。
⑶寄生蟲(chóng)感染:腸道寄生蟲(chóng)感染不同地區人群差異較大?;紫x(chóng)(Ascaris)感染率為0.98%~43.4%,可引起腸蛔蟲(chóng)病,嚴重者導致兒童營(yíng)養不良及發(fā)育障礙。鉤蟲(chóng)(Hookworm)感染率為3.6%~5.90%,能引起消化不良、腹瀉,重者出現貧血及腸出血。蟯蟲(chóng)(Pinworm)感染率為10.2%左右,病人主要表現為肛門(mén)及會(huì )陰部皮膚瘙癢,引起失眠、消化功能紊亂。溶組織內阿米巴(Entamoeba histolytica)引起阿米巴痢疾,果醬樣粘液血便;藍氏賈第鞭毛蟲(chóng)感染率為11.34%左右,以脂瀉為特征;結腸小袋纖毛蟲(chóng)、貝氏等孢子球蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)等可引起腹瀉。
㈤外科與創(chuàng )傷感染的檢查
1、適應癥
⑴軟組織的急性化膿性炎癥:癤、癰、蜂窩組織炎、丹毒等。
⑵化膿性疾?。杭诇涎?、膿性指頭炎、化膿性關(guān)節炎、氣性壞疽、細菌性結膜炎、化膿性中耳炎、急性乳房炎、急慢性膽囊炎、急性梗阻性膽管炎、化膿性胸膜炎、結核性胸膜炎、原發(fā)性腹膜炎、結核性腹膜炎、腹腔膿腫、直腸或肛管周?chē)撃[、腎膿腫、肝膿腫、化膿性闌尾炎等。
⑶創(chuàng )傷感染:術(shù)后切口感染、導管感染、臍帶殘端感染等。
2、標本采集
采樣前在病灶局部應禁用抗菌藥物或消毒劑,有傳染性的標本應在完全隔離的條件下采集。
⑴手術(shù)切口、各種竇道或創(chuàng )傷化膿性感染標本的采集:采集時(shí)先用無(wú)菌生理鹽水擦洗感染灶,清除表面滲出物,深部膿液最好用無(wú)菌注射器抽取,標本量很少或特殊部位用無(wú)菌棉拭子采集,標本分別放無(wú)菌容器及運送培養基內送檢。
⑵閉合性膿腫標本采集:嚴格消毒皮膚后,用無(wú)菌注射器抽取膿液。①將一部分膿液直接注入需氧菌和厭氧菌培養瓶中(或庖肉培養基)增菌培養。②將另一部分膿液充滿(mǎn)無(wú)菌小瓶?jì)人蜋z,用于直接細菌涂片和直接細菌培養。也可以立即排盡注射器內空氣,針尖插入無(wú)菌的橡膠塞內避氧并立即送檢,做厭氧菌培養。
⑶放線(xiàn)菌感染標本的采集:膿液中的“硫磺樣顆?!狈艧o(wú)菌容器內送檢(避免接觸空氣)。
⑷胸水、腹水的采集:無(wú)菌采集1ml以上,置于含肝素的無(wú)菌試管內,常溫下15min內送檢。需做厭氧菌培養的標本直接注入厭氧菌培養瓶中(或庖肉培養基)增菌培養。
3、常見(jiàn)感染的病原體檢查
⑴肉眼觀(guān)察:觀(guān)察標本的顏色、粘稠度和氣味等,可初步推測感染的細菌。手術(shù)后切口或創(chuàng )傷的膿液為藍綠色,可能是銅綠假單胞菌感染。從竇道內吸出的膿液有黃色的“硫磺顆?!?,為放線(xiàn)菌感染。膿液或分泌物有惡臭,疑為厭氧菌感染。局部組織產(chǎn)生大量氣體,組織腫脹和壞死,皮下有捻發(fā)音,是產(chǎn)氣莢膜梭菌感染。干酪樣的膿液可能為結核菌感染。
⑵涂片檢查
①膿液標本:直接在潔凈的玻片上涂片,革蘭染色鏡檢,見(jiàn)到菌體為革蘭陽(yáng)性球菌呈葡萄狀排列疑為葡萄球菌,呈鏈狀排列可能為鏈球菌;革蘭陽(yáng)性粗短大桿菌,兩端鈍圓,可能是產(chǎn)氣莢膜梭菌;若為革蘭陽(yáng)性、抗酸染色陰性的不規則的分枝狀菌絲體,放線(xiàn)菌可能性大;抗酸染色菌體部分呈陽(yáng)性疑為奴卡菌感染;革蘭陰性桿菌呈兩端鈍圓、多形性、著(zhù)色不均勻、有空泡可能是脆弱類(lèi)桿菌感染。
②胸水、腹水標本:3000轉/分離心10min后取沉淀物涂片,經(jīng)革蘭染色或抗酸染色鏡檢??赡馨l(fā)現單一細菌或混合菌群,可直接報告。
⑶分離培養與鑒定
①一般細菌培養:標本接種在血瓊脂平板、及腸道弱選擇培養基及皰肉湯上培養。根據細菌染色、形態(tài)和生化特性及血清學(xué)等方法鑒定細菌。
②厭氧菌培養:標本直接接種或轉種增菌生長(cháng)的菌液于強化血平板和選擇培養基上,在厭氧環(huán)境(厭氧箱或厭氧罐)中培養。根據菌落生長(cháng)特點(diǎn)、耐氧試驗、細菌染色、形態(tài)和生化特性等鑒定厭氧菌。
③奴卡菌培養:奴卡菌在血平板上生長(cháng)較慢,48~72h菌落表面粗糙、顆粒狀,深入培養基內生長(cháng),難于刮取,不同菌株產(chǎn)生不同的色素,巴西奴卡菌菌落表面有白色菌絲生長(cháng),根據菌落生長(cháng)特點(diǎn)、菌體染色及形態(tài)和生化反應鑒定細菌。
④放線(xiàn)菌培養:用含有“硫磺顆?!钡哪撘涸趨捬醐h(huán)境中培養。
4、臨床意義
⑴需氧菌感染:需氧菌或兼性厭氧菌引起傷口感染,淺表或深部外科切口感染以及腹腔、盆腔、胸腔、膽道、骨和關(guān)節等部位化膿性感染。常見(jiàn)感染的革蘭陰性菌有大腸埃希菌、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、變形桿菌、不動(dòng)桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、銅綠假單胞菌。革蘭陽(yáng)性球菌有表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌等。銅綠假單胞菌常引起腿部外傷、燒傷和褥瘡的感染,金黃色葡萄球菌常引起癤、癰、膿腫、化膿性關(guān)節炎等,2002年6月美國首例報道從一位患有糖尿病、慢性腎衰的透析病人插管部位分離出一株耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌(VRSA)。乙型溶血性鏈球菌引起丹毒、急性蜂窩組織炎、化膿性關(guān)節炎及創(chuàng )傷感染。表皮葡萄球菌為條件致病菌,可引起外科傷口感染。
⑵厭氧菌感染:厭氧菌常引起深部組織感染,有腹腔、膽道、胸腔、肺部、顱內、肛周、陰囊等各個(gè)部位感染;常見(jiàn)感染厭氧菌有產(chǎn)氣莢膜梭菌、類(lèi)桿菌群、普雷沃特菌、卟啉單胞菌和消化鏈球菌等。創(chuàng )傷深部多見(jiàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染。曾從一名糖尿病男性患者的陰囊膿腫物中曾分離出一株芽胞梭菌。
⑶放線(xiàn)菌感染:厭氧放線(xiàn)菌從口腔破損的粘膜侵入局部引起面部、頸部感染,使其局部形成膿腫、多發(fā)性竇道,排出的膿液中有肉眼可見(jiàn)的帶有白色、黃色或棕色的硫磺顆粒。衣氏放線(xiàn)菌(A.israelii)為最常見(jiàn)感染菌。放線(xiàn)菌也可侵入腸粘膜引起腹部放線(xiàn)菌病。
⑷奴卡菌感染:為需氧放線(xiàn)菌,引起急性或慢性奴卡菌病,多為外源性感染。免疫功能低下者如老年人、糖尿病病人、AIDS和器官移植者為易感人群,有作者報道540例心肺移植受者中有10例感染奴卡菌,經(jīng)治療無(wú)一例死亡。奴卡菌,常見(jiàn)感染菌為巴西奴卡菌,也可因外傷侵入皮下組織,形成膿腫和多發(fā)性瘺管,好發(fā)于足部和腿部,重癥感染者發(fā)生播散性轉移感染,引起腦膿腫,出現高熱,甚至昏迷,如果病因明確、采取積極治療常夠挽救病人生命。
㈥中樞神經(jīng)系統感染的檢查
1、適應癥
出現劇烈頭痛伴發(fā)熱、惡心、嘔吐、頸項強直、反射異常、昏迷等中樞神經(jīng)系統感染的癥狀疑為腦炎和腦膜炎。
2、標本采集
在嚴格無(wú)菌操作下采集腦脊液2~3ml,但為了直接做需氧菌和厭氧菌的增菌培養,標本采集量應適當增加。疑為腦膜炎奈瑟菌感染時(shí),標本注意保溫并立即送檢,絕對不能放置冰箱保存。
3、常見(jiàn)感染的病原體檢查
⑴直接涂片檢查
①革蘭染色:腦脊液經(jīng)3000rpm離心15min,取沉淀物涂片、革蘭染色鏡檢,見(jiàn)到革蘭陰性雙球菌,菌體呈腎形成雙排列,初步推測是腦膜炎奈瑟菌(圖3-1-1);其他細菌根據染色、形態(tài)特點(diǎn)等初步報告結果。
②抗酸染色:結核分枝桿菌或其他分枝桿菌抗酸染色呈陽(yáng)性、奴卡菌為抗酸染色部分陽(yáng)性。
③墨汁負染色:取腦脊液離心沉淀物于潔凈玻片上,加入適量?jì)?yōu)質(zhì)墨汁與之混合,覆蓋玻片,用高倍鏡觀(guān)察,在黑背景下見(jiàn)到圓形或卵圓形菌體,直徑為5~20μm大小,有的有芽生孢子,細胞外有一層較厚的莢膜,折光性強,細胞內有一個(gè)較大的反光脂質(zhì)顆粒,或若干小顆粒,可以初步報告見(jiàn)到新生隱球菌(圖3-1-2)。
④瑞氏或姬姆薩染色:2ml腦脊液,2000rpm離心5min,取沉淀物涂片直接顯微鏡檢查,或者瑞氏或姬姆薩染色后顯微鏡檢查,觀(guān)察腦脊液中有無(wú)寄生蟲(chóng)或蟲(chóng)卵。
⑵分離培養與鑒定
①腦膜炎奈瑟菌和一般細菌:用離心沉淀腦脊液或增菌生長(cháng)的培養液接種在巧克力瓊脂或血平板上培養。若培養時(shí)間長(cháng)、腦膜炎奈瑟菌有自溶現象。根據菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)、生化試驗和血清學(xué)分型鑒定細菌。
②結核分枝桿菌:取腦脊液或其沉淀物接種于結核菌選擇培養基中培養。(方法見(jiàn)尿液結核菌培養)。
③厭氧菌:取腦脊液或其沉淀物接種在強化血平板和選擇培養基上厭氧培養。(方法見(jiàn)血液厭氧菌培養)。
④新生隱球菌(Cryptococcus neoformans):取腦脊液離心沉淀物接種于沙氏培養基或血瓊脂平板上培養。在血平板上可見(jiàn)乳白色酵母樣菌落。脲酶試驗陽(yáng)性。根據菌體形態(tài)和糖同化試驗等鑒定或用免疫熒光法直接檢測。
⑶乳膠凝集試驗:能直接、快速檢測腦脊液中致病菌可溶性抗原,目前有檢測新生隱球菌、肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌等商品試劑盒。
4、臨床意義
⑴細菌感染:①球菌感染性腦膜炎:腦膜炎奈瑟菌是引起嬰幼兒和青少年急性化膿性腦膜炎的常見(jiàn)細菌,該菌通過(guò)飛沫傳播而導致流行性腦膜炎爆發(fā)流行。肺炎鏈球菌性腦膜炎多見(jiàn)于兒童和老年人,B群鏈球菌引起的新生兒腦膜炎多是由于新生兒經(jīng)產(chǎn)道分娩時(shí)感染;A群鏈球菌性腦膜炎常與中耳炎和鼻竇炎感染相關(guān);引起腦膜炎的球菌還有葡萄球菌、腸球菌、卡他布蘭漢菌。厭氧消化鏈球菌可與需氧菌一起引起腦膿腫。②桿菌感染性腦膜炎:b型流感嗜血桿菌、大腸埃希菌、克雷伯菌、假單胞菌、腦膜敗血黃桿菌常引起免疫功能低下的新生兒、嬰幼兒、老年人急性腦膜炎。類(lèi)桿菌群、普雷沃特菌和卟啉單胞菌等厭氧菌引起腦膿腫。結核分枝桿菌、奴卡菌和產(chǎn)單核李斯特菌可引起慢性腦膜炎,結核性腦膜炎近年來(lái)有回升趨勢。
⑵真菌感染:新生隱球菌、白念珠菌感染引起慢性或亞急性腦膜炎。免疫功能低下者如腎移植、淋巴瘤患者等容易感染,艾滋病患者中感染率高,若治療不當有很高的病死率。
⑶病毒感染:①流行性乙型腦炎病毒(epidemic type B encephalitis virus)感染引起流行性乙型腦炎,人群對此病毒普遍易感,而且多數人感染后無(wú)癥狀而呈隱性感染,少數患者病情較重、死亡率較高,可留后遺癥。②除脊髓灰質(zhì)炎病毒外,還有其它一些病毒,如新腸道病毒68~71型、科薩奇病毒A或B也可引起腦膜炎或腦炎。
⑷寄生蟲(chóng)感染:中樞神經(jīng)系統感染的寄生蟲(chóng)較多,如糞類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)、旋毛蟲(chóng)、廣州管圓線(xiàn)蟲(chóng)、棘顎口線(xiàn)蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)、曼氏迭宮絳蟲(chóng)的裂頭蚴、豬帶絳蟲(chóng)的囊尾蚴、細粒棘球絳蟲(chóng)的棘球蚴、多房棘球絳蟲(chóng)、溶組織內阿米巴、弓形蟲(chóng)、錐蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)等,在腦脊液中可查到的寄生蟲(chóng)或蟲(chóng)卵包括溶組織內阿米巴大滋養體、弓形蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)卵、易位寄生的日本血吸蟲(chóng)卵、糞類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)、棘球蚴的原頭節和游離小鉤、棘顎口線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)、廣州管圓線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)等。由于腦脊液涂片顯微鏡能查到寄生蟲(chóng)的陽(yáng)性率較低,故陰性時(shí)并不能除外某種寄生蟲(chóng)感染。
病原體感染后,機體免疫系統活化,產(chǎn)生針對病原體特異抗原的抗體。第一次免疫應答從抗原免疫到抗體水平達到高峰的時(shí)間為6~10d,最初幾天血清中的特異性抗體主要為IgM,后期以IgG為主。若機體第二次再次接觸該抗原時(shí),血清中將迅速出現特異性抗體,其達到高峰時(shí)間僅為4~5d,血清中的抗體以IgG為主,而且高峰濃度維持時(shí)間較長(cháng)。特異性抗體的產(chǎn)生是診斷病原體感染的重要依據,血清學(xué)診斷(serological diagnosis)就是用已知病原體(如細菌、病毒)或特異性抗原(病原體特異的成分或產(chǎn)物),用凝集試驗、沉淀反應、補體結合試驗、免疫熒光試驗(IFA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等免疫血清學(xué)試驗檢測患者血清中有無(wú)相應的特異性抗體及其滴度的動(dòng)態(tài)變化,可以輔助診斷感染性疾病。但有一部分血清學(xué)試驗所用的抗原為病原體的共同抗原,其陽(yáng)性結果為非特異性。一些病原體感染的血清學(xué)診斷試驗對圍產(chǎn)期感染所致的流產(chǎn)、早產(chǎn)、先天畸形、智力發(fā)育障礙、死胎等檢查具有普遍意義,常作為組合試驗用于婦產(chǎn)科及優(yōu)生優(yōu)育的常規檢查項目,例如,臨床常用的TORCH感染的血清學(xué)診斷,TORCH指的是弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii,TO)、風(fēng)疹病毒(Rubella virus, R)、巨細胞病毒(Cytomegalovirus, C)、單純皰疹病毒(Herpes simplex virus, H)四種病原體的縮寫(xiě),TORCH試驗一般指這四種病原體抗體的檢測。
一、細菌感染的血清學(xué)診斷
㈠C反應蛋白測定
C反應蛋白(C reactive protein,CRP) 是一種由肝臟合成的糖蛋白,由于能與肺炎鏈球菌菌體多糖“C”起反應,因而得名CRP,屬于一種急性時(shí)相蛋白(acute phase preteins)。定量測定血清中CRP的含量,對輔助診斷細菌感染、鑒別細菌與病毒感染等有重要的臨床意義。
1、適應癥:
⑴診斷與監測感染,尤其是在微生物學(xué)檢查較慢或不能檢查時(shí)更有意義。
⑵鑒別細菌與病毒感染,如病毒性與細菌性腦膜炎、肺炎。
⑶鑒別手術(shù)后感染綜合癥。篩查急慢性器官損傷性疾病,如急性心急梗死、深靜脈血栓、感染、惡性腫瘤、風(fēng)濕病等。
⑷檢測對抗生素治療的反應。
2、標本采集:血清或血漿。
3、檢測方法:ELISA、免疫滲透、速率散射比濁等方法。
4、參考范圍:血清0.07~8.2 mg/L(速率散射比濁法)。
5、臨床意義
⑴急慢性感染和組織損傷的篩查:①急性、慢性細菌感染性疾病,如各種急慢性化膿性炎癥、菌血癥和敗血癥等,血清CRP明顯升高,。外傷后6h血清CRP濃度升高,48h達到峰值。②正常的CRP并不能完全排除輕微的、局部的炎癥或某些慢性病,如系統性紅斑狼瘡、進(jìn)行性系統硬化癥。CRP升高的程度可反映炎癥組織的范圍或活動(dòng)性。③CRP濃度與病情輕重相關(guān),10~50mg/L時(shí)多為輕度炎癥,如局部細菌感染(如膀胱炎、支氣管炎、局部膿腫)、手術(shù)、外傷、心肌梗死、深靜脈血栓、靜止期風(fēng)濕病、惡性腫瘤、病毒感染等; 50~100mg/L時(shí),表明炎癥反應較重;CRP>100mg/L時(shí),提示炎癥反應嚴重,而且常為細菌感染。
⑵細菌與病毒感染的鑒別:①細菌感染時(shí)顯著(zhù)升高,病毒感染時(shí)不增高或僅有輕度增高。②一般情況下,革蘭陰性菌感染升高最顯著(zhù),常>100mg/L,有時(shí)可達500mg/L;革蘭陽(yáng)性菌感染通常出現中等程度的CRP升高,多為100mg/L左右;病毒感染時(shí),CRP增高不顯著(zhù),一般不超過(guò)50mg/L。③細菌與病毒感染通過(guò)CRP升高的程度得以鑒別,例如腦膜炎和呼吸道感染時(shí),若CRP>100mg/L,強烈支持細菌感染。
⑶監測治療和判斷預后:①連續測定CRP可監測治療效果,CRP升高的急性炎癥可選用抗生素治療,尤其是對缺乏微生物學(xué)診斷的高?;颊咻^為重要;當CRP降至參考范圍時(shí),可停用抗生素治療。根據CRP水平的變化,可選擇用藥的劑量。②CRP持續增高,表明炎癥為消退,治療失敗,預后較差,例如惡性腫瘤、嚴重感染、心肌梗死等。
⑷機體的急性時(shí)相反應:急性組織或器官壞死(如急性心肌梗死、大手術(shù)后、、嚴重創(chuàng )傷),惡性腫瘤、風(fēng)濕性疾病活動(dòng)期等,CRP可增高。
6、評價(jià)與問(wèn)題:
血清CRP增高并非細菌感染的特異性指標,應注意與急性時(shí)相反應鑒別。不同測定方法的參考范圍有差別。CRP與其他急性時(shí)相反應檢查如白細胞計數、紅細胞沉降率的檢測更簡(jiǎn)便,在急性時(shí)相反應時(shí)靈敏、快速。
㈡抗鏈球菌溶血素“O”測定
A組溶血性鏈球菌感染后,可產(chǎn)生鏈球菌溶血素O(streptolysin O,SO)等外毒素,SO具有溶解紅細胞、破壞白細胞和血小板的作用,而且抗原性強,可刺激機體產(chǎn)生抗SO的抗體(anti-streptolysin O,ASO)。ASO在A(yíng)組溶血性鏈球菌感染后1~3周至病后數月到1年內可在患者血清中檢出ASO,其滴度的高低有助于A(yíng)組溶血性鏈球菌感染有關(guān)疾病的診斷與鑒別。
1、適應癥:①協(xié)助診斷A組溶血性鏈球菌感染。②輔助診斷風(fēng)濕性疾病、急性腎小球腎炎。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:溶血法、乳膠凝集試驗,速率散射比濁法等。
4、參考范圍:<1:400或<500單位(溶血法、乳膠凝集法),<200U/ml(速率散射比濁法)。
5、臨床意義:①一般A組溶血性鏈球菌感染一周后ASO開(kāi)始升高,3~5周達到高峰,第2個(gè)月開(kāi)始下降,6~12個(gè)月恢復到感染前水平。②A(yíng)SO滴度>1:400為增高,表明患者有近期A(yíng)組溶血性鏈球菌感染,見(jiàn)于A(yíng)組溶血性鏈球菌感染性菌血癥、敗血癥、心內膜炎、腦膜炎,急性咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染、皮膚軟組織感染。③A組溶血性鏈球菌感染后的變態(tài)反應性疾病,如急性腎小球腎炎、風(fēng)濕性疾?。ㄈ顼L(fēng)濕性關(guān)節炎、心肌炎、心包炎)ASO滴度常顯著(zhù)增高,有助于診斷。④少數非溶血性鏈球菌感染,如結核病、結締組織病、感染性心內膜炎等,ASO滴度可增高。
6、評價(jià)與問(wèn)題:由于A(yíng)組溶血性鏈球菌感染較為常見(jiàn),健康人群中也存在一定滴度的ASO,但一般<1:400,在判斷結果時(shí)應注意。
㈢肥達試驗
傷寒沙門(mén)菌(Salmonella typhi)感染人體后,潛伏期為7~20d,發(fā)病后約2周機體出現免疫反應,其菌體抗原(O抗原)和鞭毛抗原(H抗原)刺激機體產(chǎn)生特異性抗體,針對O抗原的抗體以IgM為主,而抗H抗原的抗體以IgG為主。A、B、C三型副傷寒沙門(mén)菌(Salmonella paratyphi)感染后,其O和H抗原也能刺激機體產(chǎn)生抗體。肥達試驗(Widal test)是測定患者血清中有無(wú)各種特異性抗體及其滴度,結合沙門(mén)菌的分離培養、鑒定,或者在前者失敗的情況下,輔助診斷傷寒和副傷寒。
1、適應癥:傷寒和副傷寒的輔助診斷
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:用已知傷寒沙門(mén)菌O抗原和H抗原,A、B、C三型副傷寒沙門(mén)菌H抗原與受檢血清做試管或微孔板定量凝集試驗,以“++”凝集的最高血清稀釋度為滴度。
4、參考范圍:傷寒沙門(mén)菌O抗體<1:80、H抗體<1:160,A、B、C三型副傷寒沙門(mén)菌H抗體<1:80。
5、臨床意義:①因預防接種或隱性感染,血清中可含有一定量的有關(guān)抗體,且其滴度隨地區而有差異。當傷寒沙門(mén)菌O凝集滴度≥1:80,H凝集滴度≥1:160,或副傷寒的沙門(mén)菌H凝集滴度≥1:80時(shí)有診斷意義。單次滴度增加不能定論,應在病程中逐周復查。若滴度逐次遞增或恢復期滴度比初次≥4倍者有診斷意義。②O與H抗體的診斷意義:O抗體出現較早為IgM,持續約半年,消退后不易受非特異病原刺激而重現。H抗體出現較晚為IgG,持續時(shí)間長(cháng)達數年,消失后易受非特異病原刺激而能短暫重現。因此,若O、H凝集滴度均超過(guò)參考范圍,則傷寒和副傷寒的可能性大;若兩者均低,患病的可能性??;若O不高H高,可能預防接種或非特異性回憶反應;若O高H不高,則可能感染早期或與傷寒沙門(mén)菌O抗原有交叉反應的其他沙門(mén)菌感染。③少數病例在整個(gè)病程中,肥達試驗結果為陰性,其原因可能是早期使用抗生素治療、患者免疫功能低下或用免疫抑制劑治療所致,發(fā)生率約為10%左右。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①現已可用ELISA測定傷寒和副傷寒沙門(mén)菌IgM抗體,在發(fā)病后一周開(kāi)始升高,其靈敏度和特異性?xún)?yōu)于肥達試驗,而且具有早期診斷價(jià)值。②IgM抗體滴度>1:20對診斷傷寒攜帶者有一定意義。
㈣結核分枝桿菌抗體測定
人類(lèi)對結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)的感染相當普遍,全世界大約1/3的人已感染過(guò),但發(fā)生結核病者仍是少數,全球約有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結核患者,每年新發(fā)病例約有1000萬(wàn)人,近年來(lái)發(fā)病呈上升趨勢。結核分枝桿菌感染后,機體可產(chǎn)生抗體,但這些抗體在抗結核免疫中一般無(wú)保護作用。
1、適應癥:輔助診斷結核病,尤其是肺外結核病。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:用結核菌素純化蛋白衍生物(purified protein derivative, PPD)作為抗原包被到固相載體上,檢測血清中對應的抗體。常用ELISA。
4、參考范圍:陰性。
5、臨床意義:肺結核病的實(shí)驗診斷主要依靠痰涂片抗酸染色查到抗酸桿菌、分離培養與鑒定和分子生物學(xué)診斷。但由于痰涂片抗酸染色查抗酸桿菌的靈敏度低,分離培養與血清學(xué)鑒定的周期長(cháng)、難度大,分子生物學(xué)診斷開(kāi)展較少、假陽(yáng)性率較高,使結核病的實(shí)驗診斷較為困難?;颊哐逯械目筆PD抗體陽(yáng)性,可作為結核分枝桿菌感染的快速診斷方法之一,80%~90%的肺結核患者可為陽(yáng)性,特別是對肺外結核的診斷有參考意義。
6、評價(jià)與問(wèn)題:由于健康人群感染結核分枝桿菌較為常見(jiàn),血清種可出現的一定滴度的結核分枝桿菌抗體,但并不一定發(fā)病,其檢查結果應密切結合臨床和其他檢查進(jìn)行診斷。
㈤幽門(mén)螺桿菌抗體測定
幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)感染非常普遍,感染人體后可引起消化性潰瘍、慢性淺表性胃炎和萎縮性胃炎等。檢測患者血清中抗HP菌體或脲酶的抗體是較為常用的無(wú)創(chuàng )性診斷HP感染的手段之一。
1、適應癥:慢性淺表性胃炎、萎縮性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍的輔助診斷。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:間接免疫熒光法(IFA)、乳膠凝集試驗、ELISA等。
4、參考范圍:IgG、IgA型抗體的滴度<1:100(IFA)。
5、臨床意義:①HP感染后,血清中可出現IgG、IgA型抗體。IgG抗體滴度升高并可持續數年,若在兩周內滴度增加超過(guò)4倍,為急性感染。 IgA型抗體一般僅在局部產(chǎn)生,不一定每例患者均能檢測到。②IgG抗體滴度升高被認為是HP慢性感染的標志,陽(yáng)性IgA型抗體與胃炎的活動(dòng)性呈良好的相關(guān)性。約70%的活動(dòng)性胃炎患者血清中可查到抗HP抗體,60%~90%的潰瘍病患者的病情與抗HP抗體相關(guān)。③在胃炎或潰瘍病治療約6個(gè)月后,IgG抗體滴度明顯下降提示治療有效。
6、評價(jià)與問(wèn)題:由于HP的IgG抗體維持時(shí)間較長(cháng),檢測血清中IgG抗體不宜作為胃炎或潰瘍病治療后是否根除的診斷試驗。
㈥嗜肺軍團菌抗體測定
1976年在美國費城舉行退伍軍人集會(huì )期間,爆發(fā)了一種不明原因的、以發(fā)熱、咳嗽為主的呼吸道流行性感染性疾病,后來(lái)分離的致病菌在1978年由WHO正式命名為軍團菌(legionella)。軍團菌可引起肺炎型和非肺炎型感染,肺炎型主要由嗜肺軍團菌引起,潛伏期2~10d。軍團菌的分離培養較為困難,檢測其抗體有一定的臨床意義。
1、適應癥:協(xié)助診斷嗜肺軍團菌感染。
2、標本采集:血清,在急性期(1周內)和和恢復期(3~6周)應分別采集。
3、檢測方法:直接或間接免疫熒光法,ELISA。
4、參考范圍:陰性(間接免疫熒光法)。
5、臨床意義:嗜肺軍團菌感染后,機體可產(chǎn)生特異性抗體。感染1周內IgM抗體產(chǎn)生,2周后IgG抗體出現,一個(gè)月內達到高峰。IgM抗體增高提示急性感染早期。IgG抗體可在體內持續數月,對流行病學(xué)調查有意義。一般情況下,應進(jìn)行雙分血清抗體滴度比較分析更有意義,恢復期比急性期抗體的滴度增加4倍以上,并且≥1:128有診斷意義;單份血清的滴度>1:256(間接免疫熒光法)有診斷意義。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①嗜肺軍團菌抗體檢測方法較多,敏感度多為70%~90%,特異性多為95%以上,在判斷結果時(shí)應注意所用方法及其參考范圍。②軍團菌抗原與假單胞菌、變形桿菌、支原體、螺旋體等有交叉,可導致假陽(yáng)性反應,但抗體的滴度較低,可見(jiàn)于約20%健康人。
㈦布魯菌抗體測定
布魯菌(Brucella)為人獸共患感染性疾病的病原菌,可通過(guò)皮膚、呼吸道、消化道進(jìn)入人體引起感染,過(guò)去多見(jiàn)于牧區,近年來(lái)散發(fā)于大中城市。布魯菌病的潛伏期為5~21d,但也可高達數月。布魯菌為細胞內寄生菌,感染后機體以細胞免疫為主,也可產(chǎn)生特異性IgM和IgG抗體,一般于感染2周后血液中開(kāi)始出現。
1、適應癥:布魯菌病的輔助診斷,治療后復發(fā)的監測。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:玻片凝集試驗以滅活的布魯菌菌液作為抗原與待測血清反應,觀(guān)察凝集現象,以發(fā)生凝集血清的最高稀釋度報告。ELISA比玻片凝集試驗更敏感。
4、參考范圍:<1:80(玻片凝集試驗)。
5、臨床意義:血清學(xué)檢查對布魯菌病的診斷有意義,特別是對慢性期的患者,既有助于診斷,也能確定有無(wú)復發(fā)。當布魯菌感染后,患者還未出現臨床表現之前,血液中僅有低滴度的抗體;臨床癥狀明顯時(shí),抗體滴度急劇升高,而且在患病后一年內還可維持較高滴度,以后可維持較低的滴度或轉陰。若抗體滴度再次升高,則可能是復發(fā)或重復感染。若連續動(dòng)態(tài)觀(guān)察滴度逐漸升高,更具診斷價(jià)值。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①鏈球菌、傷寒、結核、流行性感冒、瘧疾等急性感染時(shí),玻片凝集試驗可出現低滴度凝集,但<1:80。。②約有10%的布魯菌病患者的玻片凝集試驗呈陰性。③在判斷抗體的陽(yáng)性滴度時(shí),應注意考慮當地的布魯菌的隱性感染情況。④不同試驗方法參考范圍有差異。
二、病毒感染的血清學(xué)診斷
㈠人類(lèi)巨細胞病毒抗體測定
人類(lèi)巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)屬于DNA病毒,是人類(lèi)病毒感染性疾病中最常見(jiàn)的病原體之一。大部分被HCMV感染的健康人無(wú)臨床癥狀,先天性HCMV感染可致胎兒畸形、智力發(fā)育障礙等。HCMV感染是否引起疾病與機體的抵抗力有關(guān),近年來(lái)器官移植、腫瘤的放射治療、艾滋病等患者感染HCMV增多。普通人群的HCMV攜帶率較高,而且可通過(guò)輸血感染。HCMV感染后,機體可產(chǎn)生IgM、IgG、IgA型抗體,檢測血清HCMV對診斷急性或活動(dòng)性人類(lèi)HCMV感染、了解機體對原發(fā)感染的免疫反應、篩選供血者、器官供體等有一定意義。
1、適應癥:①免疫功能受損患者,如器官移植與骨髓移植受者、接受免疫功能抑制劑治療或放化療的惡性腫瘤患者、艾滋病患者繼發(fā)的感染。②先天性和產(chǎn)時(shí)或產(chǎn)后HCMV感染。③獻血者HCMV感染篩查。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:ELISA。
4、參考范圍:HCMV-IgM、HCMV-IgG、HCMV-IgA型抗體均為陰性。
5、臨床意義:①普通人群中HCMV-IgG抗體陽(yáng)性率可達40%~90%,HCMV-IgM抗體為陰性,表明HCMV的既往感染或潛伏感染率相當高。②器官移植與骨髓移植受者、接受免疫功能抑制劑治療或放化療的惡性腫瘤患者、艾滋病患者感染HCMV,如果HCMV-IgM抗體陽(yáng)性,提示近期感染或病毒活動(dòng)期;若雙分血清HCMV-IgG抗體滴度出現4倍以上增長(cháng),表明近期活動(dòng)性感染。由于艾滋病患者免疫功能低下,感染HCMV后HCMV-IgM抗體滴度常常較低,HCMV-IgG抗體滴度也沒(méi)有進(jìn)一步升高,但HCMV-IgA型抗體滴度明顯升高。③孕婦原發(fā)性HCMV感染:母體在妊娠期間,特別是妊娠的最初3個(gè)月,HCMV可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒。孕婦原發(fā)性HCMV感染對胎兒的影響通過(guò)抗體檢查一般有四種情況:a. HCMV-IgM陰性、HCMV-IgG陽(yáng)性,大多數婦女為此結果,提示為既往感染,一般不需進(jìn)一步檢查或隨訪(fǎng);b. HCMV-IgM陰性、HCMV-IgG陰性,為易感人群,妊娠期內每2個(gè)月復查一次;c. HCMV-IgM陽(yáng)性、HCMV-IgG陰性,多為急性感染早期,但也有可能為假陽(yáng)性,可在2周后復查,如果HCMV-IgG轉為陽(yáng)性則確定為急性期感染,否則可定為假陽(yáng)性; d HCMV-IgM陽(yáng)性、HCMV-IgG陽(yáng)性,可能為妊娠期內原發(fā)感染或再次感染,應進(jìn)一步檢查臍血HCMV-IgM(20~25周)、臍血及羊水HCMV-DNA,如均為陽(yáng)性可考慮終止妊娠。④產(chǎn)時(shí)或產(chǎn)后感染:在產(chǎn)時(shí)胎兒經(jīng)過(guò)感染性的產(chǎn)道可被感染;產(chǎn)后嬰兒吸食有感染性的母乳也可導致感染。出生后6個(gè)月以上的患兒,其體內原有的母體抗體基本消失,如果出現雙分血清HCMV由陰性轉為陽(yáng)性,則提示原發(fā)HCMV感染;如果患病早期血清中有HCMV-IgG抗體,數周后的第二份血清抗體的滴度增長(cháng)4倍以上,可診斷為近期感染,也可能是活動(dòng)性感染,若雙分血清抗體的滴度未發(fā)生變化,則可能是曾感染過(guò)HCMV。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①血清學(xué)診斷HCMV感染并非特異,最好以病毒學(xué)檢查加以確診,特別是結合HCMV-DNA檢查對診斷更有意義。②HCMV在普通人群的感染率較高,必須結合患者的臨床,才能作出準確的診斷并及時(shí)進(jìn)行抗病毒治療。③HCMV感染后??芍卵毫馨图毎?、單核細胞增多、血小板減少,肝臟損傷引起血清氨基轉移酶(ALT、AST)升高。遇患者有不明原因的上述異常時(shí),可考慮作HCMV抗體檢查。
㈡風(fēng)疹病毒抗體測定
風(fēng)疹病毒(rubella virus,RV)為單股RNA病毒,是風(fēng)疹的病原體。風(fēng)疹是一種以全身麻疹樣出疹伴耳后及枕下淋巴結腫大為特征的急性呼吸道傳染病,由于風(fēng)疹病毒感染引起的癥狀較輕而一直不受重視,直到后來(lái)發(fā)現妊娠早期感染與胎兒先天缺陷有關(guān)才被重視。風(fēng)疹病毒感染后機體可產(chǎn)生特異性RV-IgM和RV-IgG抗體,檢測其滴度對診斷風(fēng)疹、產(chǎn)前診斷、優(yōu)生優(yōu)育有重要意義。
1、適應癥:風(fēng)疹的輔助診斷,妊娠早期風(fēng)疹病毒感染的篩查。
2、標本采集:血清、羊水。
3、檢測方法:ELISA。
4、參考范圍:RV-IgM和RV-IgG抗體均為陰性。
5、臨床意義:①風(fēng)疹病毒的易感人群為1~5歲的兒童和孕婦,如果RV-IgM和RV-IgG抗體均為陰性,表明無(wú)感染,可注射疫苗預防。②風(fēng)疹的輔助診斷:一般應取雙分血清,抗體滴度有4倍增高有意義。RV-IgM抗體出現為急性感染,患者在出現皮疹時(shí)即可測出,部分患者僅在皮疹后4~5d才能查到。先天性風(fēng)疹綜合征患兒一般在出生時(shí)血清中可查到IgM抗體和RV-IgG抗體(從母體獲得);在羊水中查到RV-IgM抗體也可診斷。③妊娠早期風(fēng)疹病毒感染:孕婦血清中出現RV-IgM抗體(伴或不伴RV-IgG抗體)時(shí),應考慮是否中止妊娠;如果僅有RV-IgG抗體,滴度低且無(wú)增高的變化趨勢,提示為既往感染;但急性期和恢復期雙份血清RV-IgG抗體滴度升高4倍以上,為近期風(fēng)疹病毒感染。
6、評價(jià)與問(wèn)題:風(fēng)疹病毒抗體測定應結合風(fēng)疹病毒RNA檢查更為可靠。
㈢單純皰疹病毒抗體測定
單純皰疹病毒(herpes simplex virus, HSV)屬于雙鏈DNA病毒,根據限制性?xún)惹忻盖悬c(diǎn)的不同可分為HSV-I和HSV-II兩型。HSV在人群中感染較為普遍,并可導致多種皰疹性疾病。生殖器官以外的多為HSV-I感染(約占95%),生殖器官的感染多為HSV-II(約占78%)。HSV感染后,機體可產(chǎn)生IgM、IgG、IgA型抗體。
1、適應癥:①單純皰疹性疾?。嚎谘什堪捳?、皰疹性角膜結膜炎、皮膚皰疹性濕疹、皰疹性腦炎、生殖器皰疹、新生兒皰疹。②免疫功能減低疾病,如器官移植受者、艾滋病、惡性腫瘤放化療后繼發(fā)的HSV感染。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:間接血凝試驗、ELISA。
4、參考范圍:HSV-IgM、HSV-IgG、HSV-IgA型抗體均為陰性。
5、臨床意義:①單份血清HSV抗體陽(yáng)性較難診斷HSV感染,但雙份血清HSV抗體由陰性轉為陽(yáng)性(升高4倍以上)可診斷為原發(fā)感染。IgM抗體陽(yáng)性提示近期感染,HSV-IgG抗體滴度升高多為既往感染。感染后患者的HSV-IgG抗體滴度波動(dòng)較大,不易對診斷復發(fā)感染進(jìn)行診斷。②早孕時(shí)若感染HSV可影響胎兒發(fā)育,故HSV抗體常作為優(yōu)生優(yōu)育的檢查項目之一。
6、評價(jià)與問(wèn)題:HSV感染較為普遍,也存在隱性感染??贵w檢測結果應結合病毒抗原或核酸檢查綜合分析。
㈣EB病毒抗體測定
EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)屬于一種嗜淋巴細胞的DNA病毒,主要感染B淋巴細胞。EBV感染4~6周后出現病毒血癥,EBV在被感染的B淋巴細胞中復制,并主要被細胞毒T淋巴細胞清除。細胞毒T淋巴細胞出現增生反應,在外周血中表現為以異型淋巴細胞增多的“傳染性單核細胞增多癥”。EBV具有復雜的抗原成分,包括病毒衣殼抗原(viral capsid antigen, VCA)、早期抗原(early antigen, EA)、EBV核相關(guān)抗原(EBV nuclus- associated antigen, EBNA )等,并可刺激機體產(chǎn)生相應的抗體。此外,EBV感染患者還可產(chǎn)生能與綿羊紅細胞發(fā)生凝集的嗜異性抗體。檢測EBV抗原特異的抗體和嗜異性抗體有助于診斷EBV感染相關(guān)的疾病。
1、適應癥:①傳染性單核細胞增多癥的診斷。②Burkitt 淋巴瘤、鼻咽癌等惡性腫瘤的輔助診斷。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:間接免疫熒光法、ELISA,嗜異性凝集試驗(heterophil agglutination test)。
4、參考范圍:抗VCA、抗EA、抗EBNA陰性,嗜異性凝集試驗陰性或滴度<1:28。
5、臨床意義:EBV感染相關(guān)疾病具有不同的抗體變化特點(diǎn),可通過(guò)血清學(xué)診斷和鑒別(見(jiàn)表3-2-1)。①傳染性單核細胞增多癥(Infectious mononucleosis,IM):抗VCA IgM陽(yáng)性(陽(yáng)性率約為85%),可持續4~8周,是IM急性期診斷的重要指標;抗VCA IgG陽(yáng)性且滴度較高,病愈后可持續數月或一年以上但抗體滴度保持低水平,可用于流行病學(xué)調查。約70%的患者可出現抗EA抗體,但滴度一般不高。嗜異性凝集試驗一般于發(fā)病1周后出現陽(yáng)性(滴度>1:56),2~3周抗體滴度達峰值,兩次血清滴度上升4倍以上更有診斷意義。②EBV相關(guān)腫瘤:鼻咽癌患者血清抗VCA-IgA增高,抗VCA-IgM陰性,抗VCA-IgG滴度顯著(zhù)增高,符合率達90%以上;血清抗VCA-IgA在腫瘤治療后病情好轉時(shí)滴度下降,腫瘤復發(fā)時(shí)回升。③Burkitt淋巴瘤:血清抗EA-R、抗VCA-IgG滴度顯著(zhù)升高,抗VCA-IgM陰性。
EBV感染相關(guān)疾病的抗體變化特點(diǎn)
EBV感染
相關(guān)疾病 抗VCA 抗EA-D 抗EA-R
(IgG) 抗EBNA
(IgG) 嗜異性抗體(IgM)
IgM IgG IgA IgG IgA
傳染性單核細胞增多癥 ++ +++ + + - +/- - +++
EBV既往感染 - + - - - +/- + -
EBV復發(fā)感染 +/- +++ + + + + + -
兒童EBV
亞臨床感染 ++ +++ + - - + - +/-
Burkitt淋巴瘤 - ++++ - +/- - +++ + -
鼻咽癌 - ++++ ++ + + +/- + -
6、評價(jià)與問(wèn)題:①EBV在普通人群感染較為普遍,我國五歲以下兒童約有90%以上存在EBV抗體。②嗜異性凝集試驗陽(yáng)性除傳染性單核細胞增多癥時(shí)為陽(yáng)性外,血清病、甲型肝炎、乙型肝炎、霍奇金病等也可呈陽(yáng)性,必要時(shí)應作吸收試驗進(jìn)行鑒別。
㈤流行性乙型腦炎病毒抗體測定
流行性乙型腦炎病毒(epidemic type B encephalitis virus),簡(jiǎn)稱(chēng)乙腦病毒,屬于單鏈RNA病毒,是流行性乙型腦炎(簡(jiǎn)稱(chēng)乙腦)的病原體。乙腦病毒感染后,機體可產(chǎn)生抗體,檢測IgM抗體對乙腦早期診斷有一定意義。
1、適應癥:流行性乙型腦炎的輔助診斷。
2、標本采集:血清、腦脊液。
3、檢測方法:ELISA。
4、參考范圍:乙腦病毒IgM抗體陰性。
5、臨床意義:急性流行性乙型腦炎在發(fā)病后,患者血清中3~5d即可出現特異性IgM抗體,腦脊液中最早可在第二天檢測到。特異性IgM抗體在2~3周達高峰,陽(yáng)性率可達90%以上,對乙腦的早期診斷有意義。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①乙腦的抗體還可用血凝抑制試驗、補體結合試驗等方法檢測補體結合抗體、血凝抗體等。血凝抗體產(chǎn)生早,單份血清滴度>1:320有診斷意義,雙份血清抗體滴度增高4倍以上可確診,急性期患者血清中該抗體陽(yáng)性率達70%。補體結合抗體出現晚,不能用于早期診斷。②RT-PCR檢測病毒核酸片段,適合于抗體尚未陽(yáng)性病人的早期診斷,該法的特異性和敏感性均高。
㈥人類(lèi)輪狀病毒抗體測定
人類(lèi)輪狀病毒(human rotavirus, HRV)屬于雙鏈RNA病毒,是引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體。HRV分為A~G 7個(gè)組,A組HRV感染主要引起嬰幼兒腹瀉,B組HRV感染引起成人腹瀉。HRV感染后機體可產(chǎn)生特異性IgM和IgG抗體。
1、適應癥:無(wú)粘液和膿血的非細菌性嬰幼兒急性胃腸炎、成人急性腹瀉。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:ELISA。
4、參考范圍:HRV-IgM和HRV-IgG抗體均為陰性。
5、臨床意義: 臨床嬰幼兒無(wú)粘液和膿血的非細菌性腹瀉約有一半是由HRV引起,HRV-IgM抗體陽(yáng)性提示現癥感染。成人抗HRV-IgG抗體陽(yáng)性,90%以上為既往感染,雙份血清抗體滴度有4倍或以上增高,則有診斷意義。
6、評價(jià)與問(wèn)題:HRV感染除檢查抗體外,應結合HRV-RNA和抗原檢查,診斷才更為可靠。
㈦腎綜合征出血熱病毒抗體測定
腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)是由漢坦病毒(Hantaan virus)、多布拉伐-貝爾格萊德病毒(Dobrava-Belgard virus)、漢城病毒(Seoul virus)和普馬拉(Puumala virus)病毒引起的傳染病,在亞洲地區流行的病原體為漢坦病毒和漢城病毒。病毒感染人體后,潛伏期約2周,發(fā)病時(shí)出現以高熱、出血和腎損害為主的綜合征,1982年WHO統一命名為HFRS。HFRS病毒感染后,可產(chǎn)生IgM、IgG抗體,對早期診斷有一定意義。
1、適應癥:以高熱(39~40℃),頭痛、眼眶痛、腰痛(“三痛癥”),顏面、頸部、上胸部皮膚充血(“三紅癥”),皮膚及粘膜出血,蛋白尿、管型尿、血尿伴水腫為主要臨床表現,疑為腎綜合征出血熱的輔助診斷。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:ELISA。
4、參考范圍: HFRS-IgM、HFRS-IgG抗體陰性。
5、臨床意義:HFRS感染發(fā)病后,血清中抗體出現較早,第2~3d,血清中可檢出HFRS-IgM抗體,第7~10d達高峰;HFRS-IgG抗體在3~4d出現,第10~14d達高峰并可持續多年,并后或持久的免疫力。因此,單份血清HFRS-IgM抗體陽(yáng)性、雙份血清HFRS-IgG抗體滴度升高4倍或4倍以上,對HFRS有診斷意義。雙份血清HFRS-IgG抗體滴度不升高多為既往感染,對回顧性診斷或流行病學(xué)調查有意義。
6、評價(jià)與問(wèn)題:HFRS是一種死亡率極高(可達60%)的傳染病,除檢查抗體外,應及時(shí)作病毒的核酸檢測,使診斷更為準確。此外,其他試驗也可發(fā)現較多異常結果,如血小板減少,血涂片中異型淋巴細胞增多,尿中出現大量蛋白、紅細胞和白細胞管型、尿沉渣中可見(jiàn)泌尿道脫落的巨大的融合細胞等,有助于HFRS的診斷。
三、寄生蟲(chóng)感染的血清學(xué)診斷
寄生蟲(chóng)?。╬arasitic disease)的確診依賴(lài)于查到病原體,但是在感染早期、輕度感染、單性感染(僅有雌蟲(chóng)感染)、隱性感染、某些寄生蟲(chóng)感染后寄生的部位特殊而難于查出病原體,導致臨床診斷困難時(shí),血清學(xué)試驗則可以輔助診斷寄生蟲(chóng)感染,而且對流行病學(xué)調查等也有特別的意義。
㈠囊蟲(chóng)抗體測定
囊蟲(chóng)?。╟yticercosis)是鏈狀帶絳蟲(chóng)(Taenia solium),又稱(chēng)豬肉絳蟲(chóng)的幼蟲(chóng)(囊尾蚴,又稱(chēng)囊蟲(chóng))寄生于人體皮下組織、肌肉和中樞神經(jīng)系統等組織、器官所引起的嚴重的寄生蟲(chóng)病,常產(chǎn)生嚴重后果,腦組織損傷較重者可致死。根據感染組織活檢可確診囊蟲(chóng)病,血清學(xué)試驗檢測囊蟲(chóng)的特異性IgG抗體可作為臨床篩查或輔助診斷囊蟲(chóng)病。
1、適應癥:來(lái)自絳蟲(chóng)/囊蟲(chóng)?。椅豺什。┝餍袇^,有排絳蟲(chóng)接片或食“米豬肉”史者,有疑似囊蟲(chóng)病的臨床表現尚未確診者。
2、標本采集:血清、腦脊液。
3、檢測方法:ELISA、間接血凝試驗(indirect haemagglutination test, IHA)。
4、參考范圍: IgG抗體:ELISA 血清<1:64,腦脊液<1:8;IHA血清<1:128,腦脊液<1:8。
5、臨床意義:囊蟲(chóng)病患者血清和腦脊液特異性IgG抗體滴度高于參考范圍。ELISA的陽(yáng)性率可達90%,但與棘球蚴感染患者血清有交叉反應。IHA的陽(yáng)性率可達82%,而且特異性較高。當患者有相應的臨床表現、基本排除了其他與之鑒別的疾?。ㄓ绕涫羌蝌什。?,而且血清和腦脊液特中特異性IgG抗體均為陽(yáng)性,或用ELISA、IHA兩種試驗檢查特異性IgG抗體均為陽(yáng)性,結合頭顱CT(或MRI)顯像和病史,可診斷囊蟲(chóng)病。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①不同實(shí)驗室所用血清學(xué)檢測方法有所不同,參考范圍有差異。②囊蟲(chóng)病在我國的東北、華北、河南、內蒙古較為多見(jiàn)。
㈡弓形蟲(chóng)抗體測定
弓形蟲(chóng)?。╰oxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)感染所致的一種人獸共患疾病。母體妊娠時(shí)感染可傳遞給胎兒,引起胎兒先天性弓形蟲(chóng)病。成人感染一般多為無(wú)癥狀帶蟲(chóng)狀態(tài),當機體免疫功能受損時(shí),隱性感染可活化,導致重癥弓形蟲(chóng)病,常見(jiàn)于惡性淋巴瘤、白血病、艾滋病、腫瘤的放化療。剛地弓形蟲(chóng)感染后,機體可產(chǎn)生特異性抗體。血清學(xué)試驗檢測弓形蟲(chóng)的特異性抗體有一定的臨床診斷價(jià)值。
1、適應癥:①孕前或孕期優(yōu)生優(yōu)育常規檢查,先天性弓形蟲(chóng)病診斷。②免疫功能受損有關(guān)疾病,如惡性淋巴瘤、白血病、艾滋病、腫瘤的放化療等疑為弓形蟲(chóng)繼發(fā)感染。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法: 間接免疫熒光試驗(IFA),ELISA。
4、參考范圍:IgM、IgG抗體均為陰性。
5、臨床意義:①弓形蟲(chóng)感染較為普遍,我國普通人群中弓形蟲(chóng)抗體的陽(yáng)性率為0.3%~11.8%,平均達5.3%;有些國外人群的陽(yáng)性率較高,可達25%~50%,在分析血清學(xué)診斷結果時(shí)應特別注意。一般而言,血清特異性IgM抗體陽(yáng)性提示急性感染,對早期診斷弓形蟲(chóng)病有意義。檢測特異性IgG抗體的動(dòng)態(tài)變化對慢性感染或既往感染診斷也有一定價(jià)值。②優(yōu)生優(yōu)育檢查:孕前檢查孕婦IgG抗體陽(yáng)性,提示已獲保護性免疫;若孕前檢查孕婦血清抗體為陰性、而孕期呈陽(yáng)性,則胎兒有感染弓形蟲(chóng)的危險,孕婦應自懷孕之日起每6周復查一次,如果抗體滴度逐漸升高,胎兒感染的危險性增大。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①I(mǎi)FA所測抗體多為蟲(chóng)體表膜抗原誘導的特異性抗體,因此具有早期診斷價(jià)值,但血清中有類(lèi)風(fēng)濕因子或抗核抗體時(shí)可出現假陽(yáng)性反應。②ELISA敏感性高于IFA,且特異性強,簡(jiǎn)便快速,操作易自動(dòng)化控制。采用IgM抗體捕獲試驗 (antibody-capture assay),以抗人lgM抗體檢測患者血清中IgM抗體,用于先天性以及急、慢性弓形蟲(chóng)病人IgM檢測具有較滿(mǎn)意效果,可消除類(lèi)風(fēng)濕因子的干擾。
㈢日本血吸蟲(chóng)抗體測定
日本血吸蟲(chóng)(Schistosome japonicum)屬于在我國流行的血吸蟲(chóng)病的病原體,寄生于人類(lèi)及多種哺乳動(dòng)物的靜脈血管內,患者常因嚴重感染而喪失勞動(dòng)力或遷延不愈而危及生命。機體感染血吸蟲(chóng)后可產(chǎn)生特異性IgM、IgG、IgE型抗體,對臨床診斷和流行病學(xué)調查有一定意義。
1、適應癥:血吸蟲(chóng)病流行區、有肝脾腫大、腹水,疑為血吸蟲(chóng)感染的輔助診斷。
2、標本采集:血清
3、檢測方法:①環(huán)卵沉淀試驗 (circumoval preciptin test,COPT) 為血吸蟲(chóng)病診斷最常用的試驗之一。利用血吸蟲(chóng)卵內毛蚴分泌的抗原物質(zhì)透出卵殼,與患者血清特異性抗體結合后,在蟲(chóng)卵周?chē)纬社R下可見(jiàn)的沉淀物,即為陽(yáng)性反應。通常檢查100個(gè)蟲(chóng)卵,陽(yáng)性反應蟲(chóng)卵數(環(huán)沉率)≥5%時(shí)即為陽(yáng)性。②ELISA:用純化的血吸蟲(chóng)或蟲(chóng)卵抗原成分檢測患者血清中相應的抗體。
4、參考范圍:COPT陰性,ELISA:IgM、IgG抗體均為陰性、IgE抗體為0~150IU/L。
5、臨床意義:①日本血吸蟲(chóng)病患者COPT陽(yáng)性率為94.1%~98.6%,有早期診斷價(jià)值。健康人假陽(yáng)性率約為3%左右。日本血吸蟲(chóng)病患者治療有效后COPT轉陰較慢,治療后1年轉陰率僅達27%左右,治療后2年轉陰率為40%以上,治療后4年轉陰率為80%以上。若血吸蟲(chóng)病患者距末次治療時(shí)間已3~5年,而COPT環(huán)沉率≥3%,可結合臨床表現考慮給給予再治療。②ELISA特異性和靈敏度較高(95%~100%),假陽(yáng)性率為2.6%,可區分抗體的類(lèi)型。血吸蟲(chóng)早期感染時(shí),IgM、IgE抗體陽(yáng)性,有診斷意義。IgG抗體陽(yáng)性提示處于感染的恢復期或既往感染,可持續數年。
6、評價(jià)與問(wèn)題:血吸蟲(chóng)感染的血清學(xué)診斷方法較多,包括環(huán)卵沉淀試驗、尾蚴膜反應、間接血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫酶染色試驗、酶聯(lián)免疫印漬技術(shù)等,各有一定的有缺點(diǎn),以ELISA的應用較為廣泛和實(shí)用。
四、其他病原體感染的血清學(xué)診斷
㈠立克次體抗體測定
立克次體(rickettsia)是一類(lèi)微小的桿狀或球狀體、革蘭染色陰性、專(zhuān)性寄生(除極少數外)在宿主細胞內繁殖的微生物。立克次體感染可引起多種疾病,普氏立克次體(R. prowazekii)感染引起流行性斑疹傷寒,莫氏立克次體(R. mooseri)感染導致地方性斑疹傷寒,東方立克次體(R. orientalis)感染引起恙蟲(chóng)病。由于立克次體的分離培養與鑒定較為困難,因此,檢測血清中立克次體的特異性抗體或交叉反應抗體(外斐試驗),進(jìn)行血清學(xué)診斷具有重要的臨床意義。
1、適應癥:流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、恙蟲(chóng)病的輔助診斷。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:①外斐反應(Weil-Felix reaction):變形桿菌中的某些特殊菌株如X19、X2、Xk的菌體抗原(O抗原)與某些立克次體有共同抗原,能出現交叉反應。用這些變形桿菌代替立克次體與患者血清作凝集反應,可作為立克次體感染的輔助診斷。②免疫熒光試驗(IFA)、ELISA、補體結合試驗(CFA)
4、參考范圍:外斐反應陰性,IFA、ELISA、CFA陰性。
5、臨床意義
⑴外斐反應:凝集反應滴度>1:25以上,病程中持續增高為陽(yáng)性。各種立克次體感染性疾病的外斐反應的鑒別診斷見(jiàn)表3-2-2。外斐試驗陽(yáng)性率的高低與取材時(shí)間有很大關(guān)系,通??贵w在發(fā)病第一周內多為陰性或低滴度,人體感染立克次體發(fā)病后一周后可產(chǎn)生與變形桿菌菌體抗原(OX)交叉反應的抗體,3~4周達高峰,以后很快下降??贵w滴度≥1:160時(shí)有意義,≥1:320或恢復期與急性期的雙份血清試驗凝集的滴度增加4倍以上有診斷意義。流行性斑疹傷寒的OX19凝集反應陽(yáng)性率可達100%。
表3-2-2 各種立克次體感染性疾病的外斐反應的鑒別診斷
立克次體感染性疾病 變形桿菌菌體抗原與血清的凝集反應
OX19 OX2 OXk
流行性斑疹傷寒 ++++ + -
地方性斑疹傷寒 ++++ + -
恙蟲(chóng)病 - - ++++
Q熱 - - -
⑵ELISA:可檢測血清中的特異性抗體,尤其是IgM抗體的檢出對早期診斷有意義。IFA是診斷立克次體感染較常用的方法,病程早期和晚期的雙份血清抗體滴度增加4~8倍可明確診斷。CFA多用于Q熱診斷,具有較高特異性。
6、評價(jià)與問(wèn)題:變形桿菌性泌尿系感染、傷寒、鉤端螺旋體病、回歸熱、瘧疾、布氏桿菌病、嚴重肝病等可出現外斐反應假陽(yáng)性,因此對外斐反應結果應結合臨床綜合分析。
㈡鉤端螺旋體抗體測定
鉤端螺旋體(leptospira)為細長(cháng)、一端或兩端彎曲成鉤狀的螺旋體,感染人體后引起鉤端螺旋體病?;颊咻p似感冒,重者可因鉤端螺旋體產(chǎn)生的毒素出現中毒癥狀、黃疸、肺出血、DIC、休克,甚至死亡。鉤端螺旋體感染后,機體可產(chǎn)生特異性抗體,血清學(xué)診斷有一定意義。
1、適應癥:鉤端螺旋體病的輔助診斷。
2、標本采集:①血清,應采取病程早期和晚期雙份血清,一般在疾病初期和發(fā)病第3~4周各采血一次。②腦脊液,有腦膜刺激癥狀者可采取腦脊液檢測特異抗體。
3、檢測方法:①顯微鏡凝集試驗(microscopic agglutination test,MAT):用鉤端螺旋體與待測血清反應,暗視野顯微鏡下觀(guān)察,陽(yáng)性反應出現鉤端螺旋體凝集或溶解現象。②乳膠凝集試驗(LAT):吸附鉤端螺旋體特異性抗原乳膠顆粒與待測血清反應,出現凝集為陽(yáng)性。③ELISA或IgM-斑點(diǎn)ELISA。
4、參考范圍:血清和腦脊液MAT、LAT、ELISA均為陰性。
5、臨床意義:鉤端螺旋體感染人體一周后開(kāi)始產(chǎn)生抗體,5~8周達到高峰。①MAT凝集滴度≥1:300或恢復期血清比早期血清滴度≥4倍時(shí)有診斷意義。②LAT凝集滴度>1:2為陽(yáng)性。③ELISA可檢出特異性抗體,尤其是IgM抗體對早期診斷更有意義。
6、評價(jià)與問(wèn)題:①MAT有較高的特異性,但要用活的鉤端螺旋體培養物,操作較為繁瑣。②ELISA尤其是IgM-斑點(diǎn)ELISA,簡(jiǎn)便、快速,而且有較高特異性和敏感度,尤其是可檢測抗體的類(lèi)型,更有利于早期診斷及流行病學(xué)調查。
㈢肺炎支原體抗體測定
肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia)是引起呼吸道感染的一種病原體,患者可發(fā)生咽炎、支氣管炎、肺炎和肺外并發(fā)癥。支原體肺炎約占非細菌性肺炎的1/3以上,近年來(lái)發(fā)病率有所增加。肺炎支原體感染發(fā)病后,機體可產(chǎn)生特異性和非特異性的抗體,用免疫學(xué)方法檢測對協(xié)助臨床診斷有一定意義。
1、適應癥:呼吸道感染,尤其是肺炎的診斷與鑒別診斷。
2、標本采集:血清。
3、檢測方法:①ELISA。②補體結合試驗(CFT)。③冷凝集試驗(cold agglutination test, CAT):肺炎支原體感染后,機體可產(chǎn)生一種非特異的寒冷紅細胞凝集素,能在0~4℃凝集自身或“O”型人紅細胞。試驗時(shí)取患者稀釋血清與“O”型人紅細胞在0~4℃做凝集反應,以最高血清稀釋度發(fā)生凝集的稀釋度報告滴度。Garrow建立的一種簡(jiǎn)便、快速方法較為實(shí)用:0.2ml全血與0.2ml 3.8%枸櫞酸鈉混勻,0~4℃冰箱中15~30s取出,傾斜試管觀(guān)察有無(wú)凝集反應,呈粗大絮狀凝集為陽(yáng)性。
4、參考范圍:ELISA、CFT、CAT均為陰性。
5、臨床意義:①ELISA檢出特異性肺炎支原體的IgM、IgG抗體有意義,IgM抗體對早期診斷更有價(jià)值。②CFT:主要檢測的是IgM抗體,初次感染時(shí)可呈陽(yáng)性,單份血清的抗體滴度≥1:64~128或雙份血清抗體滴度增加4倍以上有診斷意義。③CAT:肺炎支原體肺炎患者在發(fā)病后約2周出現非特異的寒冷紅細胞凝集素、4周達峰值、6周后開(kāi)始下降或消失。血清中抗體的滴度≥1:64或或雙份血清抗體滴度增加4倍以上有診斷意義。約33%~76%的肺炎支原體肺炎患者CAT陽(yáng)性。
6、評價(jià)與問(wèn)題:CAT的特異性不高,傳染性單核細胞增多癥、流行性感冒、肝硬化、冷凝集素綜合征患等部分疾病可出現假陽(yáng)性反應,應注意結合臨床或其他檢查鑒別。
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