點(diǎn)擊次數：144 發(fā)布時(shí)間：2010-6-30 10:35:14
金黃色葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal Protein A、簡(jiǎn)稱(chēng)SPA）是細胞壁抗原的主要成分，幾乎90%以上的菌株均含有這種成分，但不同的菌株含量差別十分懸殊。SPA占整個(gè)細胞壁蛋白成分的6.7%，通過(guò)胞壁肽聚糖以共價(jià)鍵與之結合。其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。
SPA的理化性質(zhì)
SPA是一種蛋白質(zhì),由亮、纈、脯、丙、蘇、甘、絲、谷丙、天門(mén)冬及賴(lài)氨酸等十種氨基酸組成。由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以無(wú)二硫鍵。紫外光譜和吸收系數為A275nm %=1.65，等電點(diǎn)為pH5.1。SPA十分穩定，用4mol/L尿素、硫氰鹽酸、6mol/L的鹽酸胍和pH2.5的酸性條件，以及加熱煮沸均不影響其活性。其分子量因測定方法不同而有所差異。
SPA部分理化參數
分子量
42 000
沉降系數S 20w（ˊS ）
2.10
擴散系數D20W（cm2/s）
4.3×10－7
Stocks半徑（nm）
5.00
摩擦比f(wàn)/f,min
2.10
粘度（n） （ml/g）
2.90
Hμggins常數
0.66
比容V（ml/g）
0.72
SPA的免疫學(xué)性質(zhì)
SPA能與人及多種哺乳動(dòng)物血清IgG分子中的Fc片段結合，結合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛；對大白鼠、綿羊的親和力差；對馬、犢牛、山羊等無(wú)親和力；對所有的魚(yú)類(lèi)、兩棲類(lèi)、爬行類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)（除少數例外）均不能與之結合。雞的IgG必須與相應的抗原形成復合物才能與SPA結合，原因可能是Ag－Ab復合物改變了IgG的Fc片段的構象。
SPA與IgG結合的亞類(lèi)主要是IgG1、IgG2和IgG4。
SPA除與IgG結合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結合，SPA菌對各類(lèi)免疫球蛋白的吸附率：IgG為90%～98%，IgM為2%～30%，IgA為1.5%～20%。
出現共沉反應的SPA與IgG必須有兩個(gè)結合部位，它們分別在Fc和Fab段上,缺一雖能與SPA結合，但不出現共沉反應，這種Fab的參與并非SPA－抗體反應?，F已研究表明，IgG與SPA的結合部位是CH2和CH3的交界處。
SPA的生物學(xué)特性
1．免疫原性與過(guò)敏原性 SPA做為免疫原能刺激免疫活性細胞合成Ig，又能與其相應抗體的Fab段結合呈現抗原抗體的特異性反應。SPA－IgG注射家兔皮下可引起Arthus樣反應，還可引起豚鼠的遲發(fā)性超敏反應。SPA體外試驗，能刺激豚鼠離體回腸收縮。
2．抗吞噬作用 由于IgG的Fc段結合點(diǎn)既是lgG調理活性結合點(diǎn)，又是SPA反應點(diǎn)。因此，SPA可與吞噬細胞競爭，結果抑制了多形核白細胞的吞噬作用，也可能是SPA阻斷調理素與吞噬細胞作用的結果。
3．固定補體 SPA－IgG和免疫復合物一樣可以固定人和某些動(dòng)物（如豚鼠、豬、狗等）血清中的補體，主要是通過(guò)補體傳統激活途徑。
4．促有絲分裂因子 SPA是一種B細胞激活劑，固相SPA作用明顯，并不需要T細胞輔助,可容性SPA作用微弱，必須有T細胞參與。
5．去封閉作用 固相SPA能部分去除腫瘤病人和帶瘤動(dòng)物血清中的封閉活性，從而降低了血清對淋巴細胞介導的細胞毒的封閉作用。
SPA的應用
SPA應用很廣，但所有應用的原理都離不開(kāi)SPA具有與IgG的Fc段的結合能力，主要應用方面如下：
1．SPA菌的協(xié)同凝集作用
用已知的標準血清，吸附到SPA菌的表面,使之成為吸附抗體的載體,再以此去診斷相應的未知抗原而產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集顆粒,診斷的抗原可以是顆粒性的,也可以是可溶性的。此種凝集相當于反向間接血凝,但省去間接血凝中的抗體純化,紅血球鞣化等復雜手續,而只需要 SPA菌體及粗制免疫血清即可。所以此法簡(jiǎn)單、快速,特異性敏感性均較滿(mǎn)意。目前已用于許多細胞和病毒的檢測及分型。
協(xié)同凝集只適用于檢測抗原，未見(jiàn)應用于檢測抗體的報道。
2．作為廣譜第二抗體
用SPA代替抗體IgG的第二抗體，有如下優(yōu)點(diǎn)：
1.SPA制備容易，性質(zhì)穩定，易純化，對人和多種哺乳動(dòng)物的IgG都能應用,不受種屬限制。而第二抗體的制備比較麻煩，且需多次免疫動(dòng)物，在應用上要受同種屬的限制
2.SPA的結合力強，相當于游離抗體與抗原的結合力，對人和兔的親和常數均為103 L/克分子，結合后對IgG的活性無(wú)影響。無(wú)論在0℃、37℃、44℃及56℃幾乎均能立即結合而無(wú)需長(cháng)時(shí)間的孵育，因此可以縮短試驗時(shí)間，第二抗體在較長(cháng)的孵育中，出現抗原分解的問(wèn)題也可以得到解決
3.SPA容易標上125 I、熒光素、辣根過(guò)氧化物酶、鐵蛋白等，因此可與多種技術(shù)相結合
4.在檢查細胞上的病毒抗原時(shí)，第二抗體往往特異性不強，會(huì )非特異性地與細胞膜上的Fc
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