一. 教學(xué)內容：
基因工程的基本內容
二. 學(xué)習內容：
本周學(xué)習基因工程的操作過(guò)程，指導進(jìn)行基因工程操作時(shí)需要的基本工具：限制酶、連接酶、運載體，了解他們的特點(diǎn)，及其在基因工程中的應用。理解基因工程操作的基本步驟，理解如何提取目的基因，怎樣將目的基因導入受體細胞，怎樣鑒定試驗的成果等等。了解基因工程對現代社會(huì )的貢獻及基因工程應用的發(fā)展。
三. 學(xué)習重點(diǎn)：
1. 基因工程的概念
2. 基因工程的操作工具
3. 運載體的基本條件
4. 基因工程的基本操作步驟
5. 基因工程的應用和發(fā)展
四. 學(xué)習難點(diǎn)：
1. 基因工程工具：限制酶、運載體
2. 運載體的基本要求
3. 基因工程的操作步驟
4. 如何檢測基因操作
5. 基因工程應用的兩面性
五. 學(xué)習過(guò)程：
（一）概念：基因工程——又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。
是指在生物體外，通過(guò)對DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導入受體細胞內進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細胞內表達，產(chǎn)生出人類(lèi)所需要的基因產(chǎn)物。
概念要點(diǎn)：
1. 在DNA分子水平上進(jìn)行設計操作的
2. 在生物體外實(shí)現的基因改造
3. 對受體細胞進(jìn)行無(wú)性繁殖
4. 重組基因最終表達獲得性狀
（二）基因操作的工具
1. 抗蟲(chóng)棉的培育：將抗蟲(chóng)的基因從某種生物（如蘇云金芽孢桿菌）中提取出來(lái)，“插入”到棉花的細胞中，與棉細胞中的DNA結合起來(lái)，在棉中發(fā)揮作用。
2. 技術(shù)要點(diǎn)
首先：從蘇云金芽孢桿菌的一個(gè)DNA分子上辨別出所需要的基因，并且把它切割下來(lái)
其次：將切割下來(lái)的抗蟲(chóng)基因與棉的DNA“縫合”起來(lái)
A. 基因的剪刀——限制性?xún)惹忻?div style="height:15px;">
全稱(chēng)： DNA限制性?xún)惹忻福ㄒ韵潞?jiǎn)稱(chēng)限制酶）。
來(lái)源：主要來(lái)自于微生物中（目前已經(jīng)發(fā)現了200多種限制酶）
特點(diǎn)：一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子
例如：從大腸桿菌中發(fā)現的一種限制酶只能識別GAATTC序列，并在G和A間切開(kāi)。
補充知識：
1. 限制性?xún)惹忻缚梢运馇秩爰毦耐庠葱訢NA分子，保護細菌自身
2. 每種限制性?xún)惹忻改茏R別DNA中4—6個(gè)核苷酸的特殊序列
3. 細菌自身相同序列被修飾（甲基化）而不被水解
4. 限制酶能產(chǎn)生交錯切口，形成粘性末端
B. 基因的針線(xiàn)——DNA連接酶
黏性末端：被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，它們之間正好互補配對，這樣的切口叫做黏性末端。
DNA連接酶：兩種來(lái)源不同的DNA用同一種限制酶來(lái)切割，然后讓兩者的黏性末端通過(guò)互補的堿基黏合起來(lái)，DNA連接酶在斷口處把兩條DNA末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)——形成共價(jià)鍵
C. 基因的運輸工具——運載體
作用：要將一個(gè)外源基因，送入受體細胞。
條件：
① 能夠在宿主細胞中復制并穩定地保存 進(jìn)行復制、表達
② 具有多個(gè)限制酶切點(diǎn) 以便與外源基因連接
③ 具有某些標記基因 便于進(jìn)行篩選
常用運載體：質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒等。
質(zhì)粒：是基因工程最常用的運載體，最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒
存在于許多細菌以及酵母菌等生物中，是細胞染色體外能夠自主復制的很小的環(huán)狀DNA分子。
特點(diǎn)：① 含有抗性基因：大腸桿菌質(zhì)粒中常含抗藥基因，如：抗四環(huán)素的標記基因
② 基因組很?。杭毦|(zhì)粒的大小只有普通細菌染色體DNA的百分之一
③ 質(zhì)粒能夠“友好”地“借居”在宿主細胞中。一般來(lái)說(shuō)，質(zhì)粒的存在與否對宿主細胞生存沒(méi)有決定性的作用。
④ 質(zhì)粒的復制則只能在宿主細胞內完成。
來(lái)源：大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農桿菌等細菌中都有質(zhì)粒。（土壤農桿菌很容易感染植物細胞，使細胞生有瘤狀物。培育轉基因植物時(shí)，常常用土壤農桿菌中的質(zhì)粒做運載體。）
六. 基因操作的基本步驟
（一）取目的基因
目的基因:是人們所需要的特定基因
蘇云金芽孢桿菌中的抗蟲(chóng)基因
植物的抗?。共《?、抗細菌）基因
種子的貯藏蛋白的基因
人的胰島素基因、干擾素基因等
主要途徑：① 從供體細胞的DNA中直接分離基因 ② 人工合成基因。
1. 直接分離基因:最常用的方法是“鳥(niǎo)槍法”，又叫“散彈射擊法”。
具體操作：供體細胞中的DNA
切成許多片段
重組DNA
受體細胞（大量復制）
基因擴增
分離含有目的基因的細胞
把帶有目的基因的DNA片段分離出來(lái)
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便
缺點(diǎn)：
① 工作量大，具有一定的盲目性
② 真核細胞的基因含有不表達的DNA片段，不能直接用于基因的擴增和表達
主要應用：如許多抗蟲(chóng)、抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
2. 人工合成基因：
（1）逆轉錄法
以目的基因轉錄成的信使RNA為模板，反轉錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需要的基因。
目的基因mRNA
單鏈DNA
雙鏈DNA（目的基因序列）
（2）化學(xué)合成法
根據已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結構基因的核苷酸序列，再通過(guò)化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因
蛋白質(zhì)氨基酸序列
mRNA序列
DNA序列
目的基因
優(yōu)點(diǎn)：目的性強，比較容易獲得真核基因序列
缺點(diǎn)：操作技術(shù)性強，不容易獲取，基因表達不容易控制
主要應用：如人的血紅蛋白基因、胰島素基因等就可以通過(guò)人工合成基因的方法獲得。
重要發(fā)展：DNA序列自動(dòng)測序儀對提取出來(lái)的基因進(jìn)行核苷酸序列分析，擴增DNA技術(shù)（也叫PCR技術(shù)），使目的基因在短時(shí)間內成百萬(wàn)倍地擴增。
A. 目的基因與運載體結合
B. 將目的基因導入受體細胞
常用受體細胞：大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細胞等。
主要手段：借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。
質(zhì)粒
細菌
目的基因擴增
感受態(tài)細胞：能夠接受外源DNA的細胞
將細菌用氯化鈣處理，以增大細菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒易進(jìn)入受體細胞。
C. 目的基因的檢測和表達
1. 轉基因結果：
① 在全部受體細胞中，真正能夠攝入重組DNA分子的受體細胞很少
② 重組DNA轉移成功的受體細胞不一定能夠表達
③ 必須通過(guò)一定的手段對受體細胞中是否導入了目的基因進(jìn)行檢測。
2. 檢測的方法
（1）抗性監測：
（2）性狀檢測：
受體細胞是否表現出特定的性狀，才能說(shuō)明目的基因完成了表達過(guò)程。
基因工程的成果與發(fā)展前景
一. 基因工程與醫藥衛生
A. 生產(chǎn)基因工程藥品
傳統藥品生產(chǎn)：直接從生物體的組織、細胞或血液中提取的
原料有限，產(chǎn)品價(jià)格昂貴。如：豬胰島素，紫草素
工程菌生產(chǎn)：通過(guò)發(fā)酵工程生產(chǎn)
高效率、高質(zhì)量、低成本的藥品。如胰島素、干擾素和乙肝疫苗等
胰島素：是治療糖尿病的特效藥。
胰島素生產(chǎn)
傳統方法
基因工程
來(lái)源
豬、牛胰腺提取
大腸桿菌工程菌分泌
產(chǎn)量
4—5克/100千克
100克/1000升培養液
比較
產(chǎn)量低、價(jià)格高、供不應求
產(chǎn)量高、工廠(chǎng)化生產(chǎn)、滿(mǎn)足患者需要
白細胞介素－2：是淋巴細胞產(chǎn)生的一種淋巴因子
本質(zhì)：小分子蛋白質(zhì)（分布于血清中）
功能：能促進(jìn)淋巴細胞活化和增殖
應用：主要用于治療腫瘤和感染性疾病
生產(chǎn)：白細胞介素－2在大腸桿菌中的高效表達，發(fā)酵工程生產(chǎn)
干擾素：是病毒侵入細胞后產(chǎn)生的一種糖蛋白
本質(zhì)：可溶性糖蛋白（分布于血清和組織液）
來(lái)源：被病毒感染的組織細胞產(chǎn)生（非病毒基因表達產(chǎn)物）
功能：
① 它是一種抗病毒的特效藥，對細菌和真菌感染作用不大
② 幾乎能抵抗所有病毒引起的感染，如水痘、肝炎、狂犬病等病毒引起的感染，
③ 干擾素對治療乳腺癌、骨髓癌、淋巴癌等癌癥和某些白血病也有一定療效。
干擾素生產(chǎn)
傳統方法
基因工程方法
來(lái)源
從人血液中的白細胞內提取
大腸桿菌及酵母菌細胞內獲得
產(chǎn)量
1mg干擾素/300L血液
20～40mg干擾素/1kg細菌培養物
比較
基因工程方法生產(chǎn)產(chǎn)量高、效果穩定、成本低，適于工廠(chǎng)化生產(chǎn)
基因工程藥物：
蛋白質(zhì)產(chǎn)品：胰島素、干擾素外、白細胞介素、溶血栓劑、凝血因子、人造血液代用品等
疫苗產(chǎn)品：預防乙肝、狂犬病、百日咳、霍亂、傷寒、虐疾等疾病的各類(lèi)疫苗。
B. 用于基因診斷與基因治療
基因工程技術(shù)還可以直接用于基因的診斷和治療。
1. 基因診斷：用放射性同位素（如32P）、熒光分子等標記的DNA分子做探針，利用DNA分子雜交原理，鑒定被檢測標本上的遺傳信息，達到檢測疾病的目的。
基本原理：分子雜交
診斷病例：
① 病毒性疾?。豪肈NA探針可以迅速地檢出肝炎患者的肝炎病毒、腸道病毒、單純皰疹病毒等多種病毒。
② 診斷遺傳性疾?。河忙拢榈鞍椎腄NA探針檢測出鐮刀狀細胞貧血癥，苯丙氨酸羥化酶基因探針檢測出苯丙酮尿癥。
③ 腫瘤診斷中的應用：用白血病患者細胞中分離出的癌基因制備的DNA探針，可以用來(lái)檢測白血病。
2. 基因治療：把健康的外源基因導入有基因缺陷的細胞中，達到治療疾病的目的
病例試驗：
半乳糖血癥：常染色體單基因隱性遺傳病
病理：乳糖代謝異常
由于細胞內半乳糖苷轉移酶基因缺陷而缺少半乳糖苷轉移酶，因此當乳糖分解成半乳糖后，不能繼續轉化為葡萄糖，過(guò)多的半乳糖在體內積聚，會(huì )引起肝、腦等功能受損
治療：體外試驗水平
用帶有半乳糖苷轉移酶基因的噬菌體侵染患者的離體組織細胞，結果發(fā)現這些組織細胞能夠利用半乳糖了
結論：用基因替換的方法治療這種遺傳病是可能的
基因治療并非對致病基因進(jìn)行修復
該種治療方法并不能穩定遺傳
二. 基因工程與農牧業(yè)、食品工業(yè)
1. 主要應用：培育高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)或具有特殊用途的動(dòng)植物新品種。
（1）通過(guò)基因工程技術(shù)獲得高產(chǎn)、穩產(chǎn)和具有優(yōu)良品質(zhì)的農作物。
如：用基因工程的方法可以改善糧食作物的蛋白質(zhì)含量。
實(shí)驗：將菜豆儲存蛋白的基因轉移到向日葵中，培育出了“向日葵豆”植株
前景：如果以此作為技術(shù)基礎，把大豆蛋白的基因轉移到水稻、小麥等糧食作物中，就可以提高這些作物的蛋白質(zhì)含量，改善它們的品質(zhì)。
（2）用基因工程的方法培育出具有各種抗逆性的作物新品種。
原理：抗性基因轉移到作物體內，將從根本上改變作物的特性。
如抗蟲(chóng)、抗病毒、抗除草劑、抗鹽堿、抗干旱、抗高溫等（自然界中細菌身上幾乎可以找到植物所需要的各種抗性）
例如：抗蟲(chóng)的煙草、番茄、馬鈴薯、玉米、大豆、油菜、棉等作物，抗黃瓜花葉病毒、苜?；ㄈ~病毒的作物，以及抗除草劑的植物等
（3）基因工程在畜牧養殖業(yè)上的應用：
病毒DNA
實(shí)驗前景：
① 特殊動(dòng)物：
將人生長(cháng)素基因和牛生長(cháng)素基因分別注射到小白鼠的受精卵，得到體型巨大的“超級小鼠”
② 乳房反應器
利用某些特定的外源基因在哺乳動(dòng)物體內的表達，從這些動(dòng)物的乳腺細胞中獲得人類(lèi)所需要的各類(lèi)物質(zhì)，如激素、抗體及酶類(lèi)等。
③ 開(kāi)辟新的食物來(lái)源
可以用基因工程的方法從微生物中獲得人們所需要的糖類(lèi)、脂肪和維生素等產(chǎn)品。
三. 基因工程與環(huán)境保護
1. 用于環(huán)境監測——用DNA探針可以檢測飲用水中病毒的含量
方法：使用一個(gè)特定的DNA片段制成探針，與被檢測的病毒DNA雜交，從而把病毒檢測出來(lái)
特點(diǎn)：快速、靈敏
（用傳統方法進(jìn)行檢測，一次需要耗費幾天或幾個(gè)星期的時(shí)間，精確度也不高。用DNA探針只需要花費一天的時(shí)間，并且能夠大幅度地提高檢測精度，據報道，1t水中有10個(gè)病毒也能檢測出來(lái)。）
2. 用于被污染環(huán)境的凈化——工程菌分解環(huán)境污染物
“超級細菌”： 把能分解三種烴類(lèi)的基因都轉移到能分解另一種烴類(lèi)的假單孢桿菌內，創(chuàng )造出了能同時(shí)分解四種烴類(lèi)的“超級細菌”
假單胞桿菌：異養需氧型
【模擬試題】
一. 判斷題
1. 重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運載體。（ ）
2. 限制酶的切口一定是GAATTC堿基序列。（ ）
3. 一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列。（ ）
4. 目的基因是指重組DNA質(zhì)粒。（ ）
5. 只要檢測出受體細胞中含有目的基因，那么，目的基因一定能成功地進(jìn)行表達。（ ）
6. 基因治療主要是對有缺陷的細胞進(jìn)行修復。（ ）
7. 基因工程在農業(yè)上的應用主要是培育高產(chǎn)、穩產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗性的農作物。（ ）
8. 用基因工程方法培育的抗蟲(chóng)植物也能夠抗病毒。（ ）
9. 基因工程在畜牧業(yè)上應用的主要目的是培育體型巨大、品質(zhì)優(yōu)良的動(dòng)物。（ ）
10. 任何一種假單孢桿菌都能分解四種石油成分，因此，假單孢桿菌是“超級細菌”。 （ ）
二. 選擇題
1. 1971年，科學(xué)家在體外做實(shí)驗，將帶有半乳糖苷轉移酶基因的噬菌體侵染半乳糖血癥患者（半乳糖苷轉移酶基因缺陷）的離體組織細胞，結果發(fā)現這些組織細胞能產(chǎn)生半乳糖苷轉移酶，恢復了將半乳糖轉化為葡萄糖的能力，從而能利用半乳糖能量。該材料說(shuō)明（ ）
A. 半乳糖血癥為顯性遺傳病，會(huì )導致體內半乳糖積聚，進(jìn)而導致肝傷害
B. 噬菌體自身攜帶有半乳糖苷轉移酶基因，能合成半乳糖苷酶
C. 實(shí)驗展示了基因治療的前景，表明能對缺陷基因進(jìn)行修復達到治療疾病的目的
D. 人類(lèi)已經(jīng)能定位并且分離出半乳糖轉移酶基因，可以通過(guò)基因探針進(jìn)行基因診斷
2. 關(guān)于基因工程的敘述正確的是（ ）
A. 限制酶只有在獲得目的基因時(shí)才用
B. 重組質(zhì)粒的形成是在細胞內完成
C. 質(zhì)粒都可以作為運載體
D. 蛋白質(zhì)結構分析可為目的基因的合成提供材料
3. 苯丙氨酸羥化酶基因探針可以用來(lái)檢測苯丙酮尿癥，其基本原理是（ ）
A. 利用苯丙氨酸羥化酶催化反應來(lái)檢測酮尿癥癥狀
B. 利用苯丙氨酸羥化酶基因測序確定是否患苯丙酮尿癥
C. 通過(guò)標記的DNA探針?lè )肿优c苯丙氨酸羥化酶基因分子雜交檢測確定
D. 通過(guò)標記的DNA探針?lè )肿优c苯丙氨酸羥化酶RNA分子雜交檢測確定
4. 關(guān)于運載體的描述中正確的是（ ）
A. 運載體的物質(zhì)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，能夠在不同的細胞間轉移基因
B. 運載體主要存在于細胞膜上，完成膜兩側的信息交流和物質(zhì)轉運功能
C. 運載體是核酸分子，能夠與基因重組完成攜帶轉移、遺傳信息的作用
D. 運載體可以是動(dòng)植物病毒，主要完成蛋白質(zhì)轉運功能
5. 基因工程操作是在哪個(gè)水平上完成的（ ）
A. 染色體水平 B. 細胞水平 C. 轉錄水平 D. DNA分子水平
三. 簡(jiǎn)答題
1. β－珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當它的功能不正常時(shí)，動(dòng)物有可能患某種疾病，如鐮刀型細胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的β－珠蛋白，想一想，應如何進(jìn)行設計？
2. 基因工程對人類(lèi)產(chǎn)生的影響都是有益的嗎？為什么？
3. 下圖是將人的生長(cháng)素基因導入到細菌M內制造“工程菌”示意圖，所用載體質(zhì)粒A，已知細菌M內不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導入細菌M后，其上的基因能得到表達。則：
（1）人工合成目的基因的途徑一般有那兩條？寫(xiě)出其過(guò)程。
（2）在分子遺傳學(xué)上C被稱(chēng)為_(kāi)____________，其特點(diǎn)是________________________。
如何根據通過(guò)A、B來(lái)構建C，請寫(xiě)出簡(jiǎn)要過(guò)程。
（3）通常用CaCl2處理M，完成導入過(guò)程，其原因是什么？導入過(guò)程的效率是很低的，只有少數的M才能稱(chēng)為工程菌，請問(wèn)如何選擇可用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)的工程菌菌株。
（4）工程菌成功表達的標志是什么？
4. 利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物，經(jīng)歷了三個(gè)發(fā)展階段。第一階段，將人的基因轉入細菌細胞；第二階段，將人的基因轉入小鼠等動(dòng)物的細胞。前兩個(gè)階段都是進(jìn)行細胞培養，提取藥物。第三階段，將人的基因轉入活的動(dòng)物體，飼養這些動(dòng)物，從乳汁或尿液中提取藥物。
（1）將人的基因轉入異種生物的細胞或個(gè)體內，能夠產(chǎn)生藥物蛋白的原理是基因能控制 。
（2）人的基因能和異種生物的基因拼接在一起，是因為它們的分子都具有雙螺旋結構，都是由四種 構成，基因中堿基配對的規律都是 。
（3）人的基因在異種生物細胞中表達成蛋白質(zhì)時(shí)，需要經(jīng)過(guò) 和翻譯兩個(gè)步驟。在翻譯中需要的模板是 ，原料是氨基酸，直接能源是ATP，搬運工兼裝配工是 ，將氨基酸的肽鍵連接成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所是 ，“翻譯”可理解為將由
個(gè)“字母”組成的核酸“語(yǔ)言”翻譯成由 個(gè)“字母”組成的蛋白質(zhì)“語(yǔ)言”，從整體來(lái)看 在翻譯中充任著(zhù)“譯員”。
（4）利用轉基因牛、羊乳汁提取藥物工藝簡(jiǎn)單，甚至可直接飲用治病。如果將藥物蛋白基因移到動(dòng)物如牛、羊的膀胱上皮細胞中，利用轉基因牛羊尿液提取藥物比乳汁提取藥物的更大優(yōu)越性在于：處于 動(dòng)物都可生產(chǎn)藥物。
5. 科學(xué)家通過(guò)基因工程培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，需要從蘇云金芽孢桿菌中提取出抗蟲(chóng)基因，“放入”棉花的細胞中與棉花的DNA結合起來(lái)并發(fā)揮作用，請回答下列有關(guān)問(wèn)題：
（1）從蘇云金芽孢桿菌中切割抗蟲(chóng)基因所用的工具是 ，此工具主要存在于 中，其特點(diǎn)是 。
（2）蘇云金芽孢稈菌一個(gè)DNA分子上有許多基因，獲得抗蟲(chóng)基因常采用的方法是“鳥(niǎo)槍法”。具體做法是：用 酶將蘇云金芽孢桿菌的 切成許多片段，然后將這些片段 ，再通過(guò) 轉入不同的受體細胞，讓它們在各個(gè)受體細胞中大量 ，從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法把 分離出來(lái)。
（3）進(jìn)行基因操作一般要經(jīng)過(guò)的四個(gè)步驟是 、 、
、 。
【試題答案】
1. × 運載體不是酶，是DNA分子
2. × 不同的限制酶有不同的識別位點(diǎn)，切割位點(diǎn)也各不相同
3. √
4. × 目的基因是自然界中存在的各種基因，為人類(lèi)所要利用的基因
5. × 目的基因轉移成功不一定能夠表達，表達是一個(gè)受調控的復雜過(guò)程
6. × 基因治療是一種補償性治療，對原來(lái)的基因沒(méi)有做修復處理
7. √
8. × 不同的目的基因功能不同，抗蟲(chóng)基因和抗病毒基因不是同一基因
9. × 轉基因動(dòng)物主要是培育能產(chǎn)生特定蛋白質(zhì)的動(dòng)物
10. × 一般假單孢菌子只能分解一種烴
二. 選擇題：
1. D 2. D 3. C 4. C 5. D
三. 簡(jiǎn)答題：
1. 提取目的基因、目的基因與運載體結合、目的基因導入受體細胞、對目的基因檢測
2. 基因工程的應用不一定都是好的：
（1）安全性問(wèn)題：對人體是否真正安全
（2）生態(tài)環(huán)境問(wèn)題：轉基因生物會(huì )不會(huì )導致生態(tài)平衡被破壞
（3）大眾能否接受：混淆了傳統意義上的界限，如動(dòng)物蛋白和植物蛋白等
（4）社會(huì )倫理道德問(wèn)題：克隆生物（人）的認可問(wèn)題
3.（1）① 逆轉錄法：利用提取的目的基因的mRNA逆轉錄出單鏈DNA，然后合成雙鏈DNA分子，獲得目的基因；② 人工化學(xué)合成法：通過(guò)分析蛋白質(zhì)的氨基酸序列，根據遺傳密碼子，推導出mRNA的堿基序列，根據堿基互補配對原則，推導出目的基因的堿基序列，通過(guò)化學(xué)方法合成。
（2）重組DNA分子（重組質(zhì)粒）；質(zhì)粒上含有目的基因；用同一種限制性?xún)惹忻阜謩e切割A、B，使A、B具有同一種粘性末端，將A、B以適當比例混合，利用DNA連接酶使形成重組質(zhì)粒C
（3）CaCl2處理使細胞壁的通透性變大，外源DNA更容易進(jìn)入細菌。
利用添加青霉素的選擇培養基培養轉到細菌，如果長(cháng)出菌落，表明該菌落細菌具有青霉素抗性，為轉導成功菌株，攜帶人生長(cháng)素基因，可作為工業(yè)生產(chǎn)用的工程菌。
（4）能夠分泌人生長(cháng)素
4.
（1）蛋白質(zhì)的合成
（2）脫氧核苷酸；A對T、G對C
（3）轉錄；mRNA；tRNA；核糖體；多個(gè)；3個(gè)；tRNA
（4）不同發(fā)育時(shí)期的
5.
（1）限制性?xún)惹忻?；微生物；只能識別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子
（2）限制性?xún)惹?；DNA分子；分別載入運載體；運載體；復制；目的基因
（3）提取目的基因；目的基因與運載體結合；將目的基因導入受體細胞；目的基因的檢測與表達
