在我們研究某個(gè)蛋白的功能的時(shí)候,我們期待能夠定位它或研究蛋白相互作用,有一種方法就是將一個(gè)通過(guò)各種方法可以檢測到的標簽蛋白的基因和目標蛋白的基因進(jìn)行重組融合,那產(chǎn)生的融合蛋白除了目標蛋白本身,同時(shí)會(huì )帶上可檢測的標簽蛋白,這樣目標蛋白也被一并檢測到。
Snap標簽是什么?
SNAP-Tag是從人的O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉移(O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase)獲得。SNAP所帶的活性巰基位點(diǎn)接受了苯甲基鳥(niǎo)嘌呤所攜帶的側鏈苯甲基基團,釋放出了鳥(niǎo)嘌呤。這種新的硫醚鍵共價(jià)結合使SNAP所帶的目的蛋白攜帶上了苯甲基基團所帶的標記物。生物素或各種顏色熒光的底物(如熒光素、若丹明)可滲透進(jìn)入細胞,方便快捷地進(jìn)行活細胞內SNAP-Tag融合蛋白的標記與檢測,它也可特異性地標記大腸桿菌,酵母和哺乳動(dòng)物等細胞抽提液或已經(jīng)純化的蛋白液中的SNAP-tag融合蛋白。
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