慢病毒載體系統是一種能非常高效的把外源基因穩定整合到哺乳動(dòng)物細胞中的載體工具。除了常規質(zhì)粒轉染外，目前該系統也是把外源基因轉入哺乳動(dòng)物細胞的最常用方法之一。由于具有目的基因和啟動(dòng)子選擇的靈活性以及轉染細胞類(lèi)型的廣泛性?xún)纱筇攸c(diǎn)，使得慢病毒載體系統成為倍受歡迎的外源基因表達系統。
慢病毒載體來(lái)源于人類(lèi)免疫缺陷病毒HIV，屬于逆轉錄病毒家族。野生型慢病毒基因組是線(xiàn)性雙正鏈RNA。
慢病毒重組載體構建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉染進(jìn)入包裝細胞。在包裝細胞中，位于兩個(gè)長(cháng)末端重復序列（LTR）之間的DNA片段會(huì )被轉錄成RNA，由輔助質(zhì)粒表達的病毒蛋白將其包裝形成病毒顆粒。包裝后的活體病毒將會(huì )被釋放到上清液中，可以直接收集或進(jìn)一步濃縮病毒轉染靶細胞。
當病毒轉導靶細胞時(shí)，釋放到宿主細胞中的病毒RNA借助逆轉錄酶逆轉錄成雙鏈DNA，然后隨機整合進(jìn)宿主細胞的基因組中。在病毒載體中，位于兩個(gè)LTR的DNA片段和病毒基因組都會(huì )穩定整合到靶細胞的基因組中。
聯(lián)系客服
