Q1:逆轉錄病毒和慢病毒是一回事嗎?可以用逆轉錄病毒包裝質(zhì)粒包裝慢病毒嗎?A1:慢病毒是逆轉錄病毒家族的一部分,通常稱(chēng)之為“逆轉錄病毒”的是逆轉錄病毒家族的另一個(gè)獨立成員——g-逆轉錄病毒。盡管慢病毒和g逆轉錄病毒使用相同的基因進(jìn)行包裝(即gag、pol和env),但這些蛋白質(zhì)的亞型以及病毒的長(cháng)末端重復序列(LTRs)是不同的。慢病毒和逆轉錄病毒包裝載體不能互換。雖然差異看起來(lái)很微小,但決定了慢病毒和逆轉錄病毒之間的關(guān)鍵生理差異。慢病毒能夠進(jìn)入一個(gè)完整的核膜,能感染分裂細胞和非分裂細胞,而逆轉錄病毒只能感染分裂細胞。在選擇合適的基因遞送系統時(shí),需要考慮特定的靶細胞或組織。Q2:可以使用慢病毒轉移載體進(jìn)行瞬時(shí)轉染嗎?A2:技術(shù)上可以。但是否真的有效,需要看情況。大多數轉移質(zhì)粒使用弱病毒LTR啟動(dòng)子來(lái)驅動(dòng)目的基因的表達。因此,蛋白質(zhì)表達水平往往比使用專(zhuān)門(mén)為瞬時(shí)表達設計的質(zhì)粒載體或病毒轉導時(shí)要低得多。雖然不理想,但病毒結構的瞬時(shí)表達是一個(gè)有用的工具,它可以在投入大量時(shí)間和資源構建穩定的細胞系之前快速檢查結構是否正常。當瞬時(shí)表達病毒結構時(shí),需要使用合適的細胞系。一些常見(jiàn)的實(shí)驗室細胞系,包括293細胞系,用腺病毒蛋白E1A永生化,該蛋白已被證明能抑制HIV-1 LTR的表達。
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