EB病毒感染的實(shí)驗室指標
EBNA二聚體帶狀模型
EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）屬于4型皰疹病毒，類(lèi)似其他皰疹病毒科的病毒，EBV感染包括增殖性感染（或稱(chēng)活動(dòng)性感染）和潛伏感染兩種狀態(tài)，EBV感染人淋巴細胞和上皮細胞，初次感染后病毒可長(cháng)期在人上呼吸道上皮細胞或淋巴組織中潛伏，潛伏感染和終生攜帶是EBV感染的重要特征。人群對EBV普遍易感，大多數人初次感染發(fā)生在兒童或青少年時(shí)期并可終生攜帶，在中國，8歲以上人群90％以上血清學(xué)陽(yáng)性。
傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis，IM） 是典型的EBV初次感染表現；值得注意的是在免疫抑制（如器官移植）、遺傳缺陷（如X連鎖淋巴組織增生）或潛伏感染的反復激活的情況下，EBV感染可能導致不良預后，如發(fā)展成為慢性活動(dòng)性EB病毒感染（CAEBV）和EBV相關(guān)的噬血性淋巴組織增生（EBV-HLH）。另外EBV還與兒童及成人的淋巴瘤等多種腫瘤發(fā)病有關(guān)。因而及時(shí)準確的實(shí)驗室診斷有助于臨床對EBV感染的時(shí)相、機體狀況和發(fā)生不良轉歸的風(fēng)險進(jìn)行評估，這對于兒童EBV感染性疾病的診斷及預后至關(guān)重要。
一、EBV—DNA測定
EBV-DNA陽(yáng)性是EBV存在的直接證據。由于潛伏感染的存在，正常人外周血單個(gè)核細胞中也常有低載量的EBV-DNA檢出（通常低于200拷貝數／m1）。在活動(dòng)感染發(fā)生時(shí)EBV在人淋巴細胞中大量增殖（IM患者一般可達103～105拷貝數／m1）并釋放到血漿或淋巴液中。隨著(zhù)感染的控制，EBV感染進(jìn)入潛伏狀態(tài)，血漿或淋巴液中的病毒顆粒迅速消失，而外周血淋巴細胞中的EBV仍將以潛伏狀態(tài)保持較高滴度數月～1年。對于復發(fā)性感染外周血EBV-DNA載量會(huì )更高，CAEBV可達105～106拷貝數／ml甚至更高，EBV-HLH一般在104～106拷貝數／ml之間。由于不同感染狀態(tài)下病毒的狀態(tài)和分布不同，EBV-DNA測定結果的解釋因標本來(lái)源的不同而有不同。
1．全血：淋巴細胞是EBV感染的靶細胞，淋巴細胞中潛伏期EBV的存在和活動(dòng)感染后長(cháng)達數月的持續陽(yáng)性使得該檢測結果不能反映現癥感染，也不適合急性感染如IM的診斷。因此外周血單個(gè)核細胞EBV-DNA定量測定更適合復發(fā)感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相關(guān)EBV感染的診斷和檢測。本方法的一個(gè)缺陷在于單個(gè)核細胞分離步驟繁瑣，自動(dòng)化程度低，定量結果受單個(gè)核細胞的分離效率影響較大。為解決這一問(wèn)題，有研究者使用吸附法抽提全血DNA進(jìn)行定量，現有大量商品化的抽提系統可供使用，抽提步驟自動(dòng)化程度大大提高，且定量結果與分離單個(gè)核細胞的測定結果具有良好的相關(guān)性。
2．血漿或血清：血漿中的EBV-DNA來(lái)自活動(dòng)感染期由感染淋巴細胞中釋放的病毒顆粒，感染被控制后血液中游離的病毒顆粒和EBV-DNA又被免疫系統迅速廓清。因此血漿或血清中的EBV-DNA只有活動(dòng)期感染時(shí)為陽(yáng)性，恢復期和潛伏感染為陰性，這使得血漿EBV-DNA成為一個(gè)很好反映活動(dòng)感染的指標，在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活動(dòng)感染患者的血漿中均可檢出，而潛伏感染者多為陰性。
3．上呼吸道標本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子：具有取材方便的優(yōu)點(diǎn)，但由于EBV在絕大多數人咽喉部定植，無(wú)論潛伏感染或活動(dòng)性感染均可檢出，常用于流行病學(xué)調查和鼻咽癌方面的一些檢查，對IM和其他兒科相關(guān)EBV感染的診斷價(jià)值有限。
就EBV-DNA檢測的方法學(xué)而言，商品化的EBV-DNA測定試劑盒自20世紀90年代末上市以來(lái)，EBV-DNA的測定經(jīng)歷了從半定量、競爭定量到熒光定量的演化，現一般采用熒光定量PCR的方法，分析性能良好，但迄今為止仍無(wú)權威的參考物質(zhì)，市場(chǎng)上多數試劑盒仍使用自制的以質(zhì)粒為基礎的標準品，適宜的第三方質(zhì)控品也不易得到，這為EBV-DNA測定的標準化帶來(lái)了一定的障礙。
二、EBV相關(guān)抗體測定
EBV初次感染時(shí)，機體首先產(chǎn)生針對其殼抗原（viral capsid antigen，VCA）的IgM抗體（VCA-IgM），然后是殼抗原低親和力的IgG抗體（VCA-IgG），隨著(zhù)抗體親和力的成熟，感染后期機體將產(chǎn)生高親和力的VCA-IgG和核心抗原抗體（EBNA-IgG）并持續終身。在急性感染中后期還會(huì )一過(guò)性早期抗原抗體（EA-IgG）出現。而IgA型的抗體與EBV進(jìn)入上皮細胞有關(guān)，持續高滴度的IgA抗體被認為和鼻咽癌有關(guān)。
血清中的EBV相關(guān)抗體主流檢測方法為ELISA、化學(xué)發(fā)光和免疫熒光法，臨床應用非常廣泛，但由于針對不同抗原或不同亞類(lèi)的抗體具有不同的臨床意義，相關(guān)抗體的組合測定有助于感染類(lèi)型和時(shí)相的判斷，檢驗項目的合理選擇和正確解釋就顯得非常重要。
VCA-IgM是最常用的EBV初次感染的指標，然而部分患者可能因VCA-IgM缺失而導致漏診；低親和力的VCA-IgG在初次感染的早期出現，也可作為初次感染的診斷指標。EBNA-IgG和高親和力的VCA-IgG都在感染后期才出現并可終生攜帶，被視為恢復期或既往感染的指標；對于免疫功能正常的個(gè)體，EBNA-IgG與VCA-IgG結合可用于初次感染和復發(fā)感染以及感染時(shí)相的判斷。
EA-IgG產(chǎn)生晚于VCA-IgG，慢性活動(dòng)感染時(shí)可持續陽(yáng)性，根據熒光模式差異EA可分為彌散型（D）和局限型（R）。結合其他抗體檢測結果，EA抗體通常用于復發(fā)感染相關(guān)疾病的診斷。
三、EB病毒感染的其他檢驗
除EBV核酸和抗體檢測外，感染者的細胞免疫功能檢測、惡性EBV感染性疾病易感基因檢測以及EBV基因分型也正越來(lái)越引起臨床的重視。
1．感染者的細胞免疫功能檢測：EBV感染者的細胞免疫功能通常通過(guò)流式細胞術(shù)進(jìn)行測定，淋巴細胞亞群方面IM患者主要體現在CD3 和CD8 細胞的增高；EBV-HLH患兒典型特征為NK細胞減少；而CAEBV患者的典型特征為2系以上血細胞計數的減低?？笶BV免疫依賴(lài)于特異性的細胞免疫，T細胞向Thl／Th2的極化狀態(tài)很大程度上決定了免疫殺傷和免疫逃避，通過(guò)測定細胞因子、極化相關(guān)轉錄因子以及外周血白細胞CCR3／CCR5表達水平可反映T細胞的極化狀態(tài)，從而對機體抗病毒免疫功能進(jìn)行評估。
2．惡性EB病毒相關(guān)疾病易感基因檢測：X連鎖淋巴組織增生是一種X染色體連鎖的先天性免疫缺陷病，患者對EBV感染高度敏感，發(fā)病急，常表現為暴發(fā)性IM、HLH、低丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤等，預后很差，70％以上患兒于10歲前死亡，因此早期診斷并及時(shí)進(jìn)行骨髓移植至關(guān)重要，相關(guān)的遺傳學(xué)突變包括X染色體上的SH2D1A和XIAP等基因。另外基因PRFl、UNC13D、STXll、STXBP2也可能與原發(fā)性HLH有關(guān)。
四、總結
EBV作為兒童時(shí)期感染的一種常見(jiàn)病毒，具有導致嚴重疾病的潛能，常規的血清學(xué)、分子生物學(xué)和分子病理學(xué)手段已廣泛應用于EBV感染及EBV相關(guān)疾病的診斷。EBV的血清學(xué)檢查和核酸載量測定是當前EBV感染相關(guān)疾病實(shí)驗室檢查的最主要手段，VCA-IgM和低親和力的VCA-IgG對現癥EBV感染具有重要意義，對于IM等急性、亞急性EBV感染而言，血清學(xué)檢查優(yōu)于在恢復期還保持很高載量的EBV-DNA。嬰幼兒、器官（或骨髓）移植者、HIV感染者、腫瘤化療患者等免疫功能不全的受檢者，血清學(xué)檢查可能帶來(lái)漏診，對于此類(lèi)患者還應結合EBV-DNA載量進(jìn)行判斷。 EBV-DNA載量的檢測對CAEBV、EBV-HLH的診斷價(jià)值高于VCA-IgM血清學(xué)檢查。
相對于EBV的核酸以及血清學(xué)檢測，對EBV感染患兒的免疫學(xué)功能評估、易感基因的檢測等近年來(lái)正成為EBV相關(guān)疾病實(shí)驗室診斷研究新的熱點(diǎn)。隨著(zhù)方法學(xué)的成熟和診斷價(jià)值的進(jìn)一步明確，可望成為EBV相關(guān)疾病診斷、監控及預后判斷新的強有力的工具。
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