送風(fēng)中微生物檢驗方法
本附錄規定了集中空調通風(fēng)系統送風(fēng)中細菌總數、真菌總數和b-溶血性鏈球菌的檢驗方法。
D1 送風(fēng)中細菌總數
D1.1原理
用儀器法采集集中空調通風(fēng)系統送風(fēng)中的細菌，計數在營(yíng)養瓊脂培養基上經(jīng)35~37℃、48小時(shí)培養所形成的菌落數，以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3）報告。
D1.2 方法與要求
D1.2.1采樣點(diǎn)：一般設在距送風(fēng)口下風(fēng)方向15~20cm處。
D1.2.2 采樣環(huán)境條件：采樣時(shí)集中空調通風(fēng)系統必須在正常運轉條件下，并關(guān)閉門(mén)窗1小時(shí)以上，盡量減少人員活動(dòng)幅度與頻率，記錄室內人員數量、溫濕度與天氣狀況等。
D1.2.3 采樣方法
以無(wú)菌操作，使用六級篩孔空氣撞擊式采樣器，以空氣流量為28.3L/min，在采樣點(diǎn)采集5-15min。
D1.3 培養
D1.3.1 營(yíng)養瓊脂培養基
成分： 蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
肉膏 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000ml
制法：將蛋白胨、氯化鈉、肉膏溶于蒸餾水中，校正pH值為7.2～7.6，加入瓊脂，121℃ 20min滅菌備用。
D1.3.2 方法：將采集細菌后的營(yíng)養瓊脂平皿置35~37℃培養48小時(shí)，計數菌落數，記錄結果并換算成cfu/m3。
D2 送風(fēng)中真菌總數
D2.1 原理
用儀器法采集集中空調通風(fēng)系統送風(fēng)中的真菌，計數在沙氏瓊脂培養基上經(jīng)28℃、5～7天培養所形成的菌落數，以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3）報告。
D2.2方法與要求
D2.2.1采樣點(diǎn)與D1.2.1款要求相同。
D2.2.2 采樣環(huán)境條件：采樣時(shí)集中空調通風(fēng)系統必須在正常運轉條件下，并關(guān)閉門(mén)窗1小時(shí)以上，盡量減少人員活動(dòng)幅度與頻率，記錄室內裝修狀況、人員數量、溫濕度與天氣狀況等。
D2.2.3 采樣方法同D1.2.3
D2.3 培養
D2.3.1 沙氏（Sabourand’s agar）瓊脂培養基
成分： 蛋白胨 10g
葡萄糖 40g
瓊脂 20g
蒸餾水 1,000ml
制法：將蛋白胨、葡萄糖溶于蒸餾水中，校正pH值為5.5～6.0，加入瓊脂，115℃ 15min滅菌備用。
D2.3.2方法：將采集真菌后的沙氏瓊脂培養基平皿置28℃培養5~7天，逐日觀(guān)察并于第7天記錄結果。若真菌數量過(guò)多可于第5天計數結果，并記錄培養時(shí)間，換算成cfu/m3。
D3 送風(fēng)中b-溶血性鏈球菌
D3.1 原理
用儀器法采集集中空調通風(fēng)系統送風(fēng)中的b-溶血性鏈球菌，經(jīng)35～37℃，24～48小時(shí)培養，在血平皿平板上形成典型菌落的為b-溶血性鏈球菌。以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3）報告。
D3.2 方法與要求
D3.2.1采樣點(diǎn)與D1.2.1款要求相同。
D3.2.2 采樣環(huán)境條件：采樣時(shí)集中空調通風(fēng)系統必須在正常運轉條件下，并關(guān)閉門(mén)窗1小時(shí)以上，盡量減少人員活動(dòng)幅度與頻率，記錄室內人員數量。
D3.3 培養
D3.3.1 血瓊脂平板
成分： 蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
肉膏 5g
瓊脂 20g
脫纖維羊血 5~10 ml
蒸餾水 1,000ml
制法：將蛋白胨、氯化鈉、肉膏加熱溶化于蒸餾水中，校正pH值為7.4~7.6，加入瓊脂，121℃ 20min滅菌。待冷卻至50℃左右，以無(wú)菌操作加入脫纖維羊血，搖勻傾皿。
D3.3.2 方法：采樣后的血瓊脂平板在35～37℃下培養24～48h。
D3.4 結果觀(guān)察
培養后，在血平皿平板上形成呈灰白色，表面突起直徑0.5~0.7mm的細小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；鏡檢為革藍氏陽(yáng)性無(wú)芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列（視培養與操作條件影響鏈可短可長(cháng)4~8個(gè)細胞至幾十個(gè)細胞）；菌落周?chē)忻黠@的2～4mm界限分明、完全透明的無(wú)色溶血環(huán)。符合上述特征的菌落為b-溶血性鏈球菌。
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