網(wǎng)友星語(yǔ)心愿：
我覺(jué)得應該從以下幾點(diǎn)去做好殘留溶劑檢查，并應從以下幾個(gè)方面展開(kāi)討論。
一、首先應學(xué)習和熟練掌握中國藥典2005年版二部附錄Ⅷ P殘留溶劑測定法的有關(guān)要求；
主要是以下幾點(diǎn)：
1、色譜柱的選擇，一般現在都要選擇毛細管柱，如果你們公司很有條件，那么極性和非極性的色譜柱都購買(mǎi)吧！我們用的是中極性的色譜柱，一般做有機溶劑殘留大多數是可以了。
2、供試品溶液的制備，主要是根據供試品的溶解度來(lái)選擇，同時(shí)也要考慮對照品在該溶劑中的溶解性。一般首先選擇溶劑水、DMF、DMSO，再考慮其它溶劑。
3、測定法的選擇，等溫和程序升溫法，進(jìn)樣方面主要有頂空和直接進(jìn)樣法，這個(gè)主要根據自身實(shí)際條件來(lái)選擇。
4、其它就不多說(shuō)了，主要看一下該殘留溶劑測定法后面的【附注】，藥品中常見(jiàn)的殘留溶劑及限度，還有相對保留時(shí)間的參考值，這個(gè)對實(shí)際做某個(gè)品種時(shí)很有用，可以提前大概知道該殘留溶劑的保留時(shí)間。
二、殘留溶劑檢查方法的選擇和驗證要點(diǎn)
1、概述
藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及制劑制備過(guò)程中使用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機溶劑。
按有機溶劑的毒性和對環(huán)境的危害，ICH將有機溶劑分為避免使用、限制使用、低毒和毒性依據尚不足四種情況。
因殘留溶劑會(huì )影響產(chǎn)品的安全性，故需對其進(jìn)行研究。
2、殘留溶劑檢查方法的選擇
殘留溶劑的測定一般采用氣相色譜法，推薦使用毛細管色譜柱-頂空進(jìn)樣系統，當然也可以使用普通填充柱，溶液直接進(jìn)樣方法。
對不宜采用氣相色譜法測定的含氮堿性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其它方法，如離子色譜法等。
測定殘留溶劑應從以下幾個(gè)方面考慮：確定被測的有機溶劑、選擇合適的色譜柱、制備供試品溶液和對照品溶液、選擇合適的進(jìn)樣方法和滿(mǎn)足檢測靈敏度要求的檢測器，下面分別進(jìn)行介紹：
2.1 確定被測的有機溶劑
根據制備工藝確定被測有機溶劑的范圍。通常應對制備工藝過(guò)程中使用的二類(lèi)以上溶劑和重結晶用溶劑，以及根據工藝特點(diǎn)要求的其它溶劑進(jìn)行殘留量的研究。建議對合成最后三步使用的三類(lèi)溶劑也進(jìn)行研究，這樣能更好地對未知峰進(jìn)行歸屬；對制劑過(guò)程中使用的有機溶劑也建議考察其殘留情況，特別是緩、控釋微丸包衣過(guò)程使用的有機溶劑更應引起注意。
殘留溶劑的限度要求同ICH的規定。
2.2 選擇合適的色譜柱
按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂漬適宜固定液的填充柱。
測定含氮的堿性有機溶劑時(shí)，由于普通氣相色譜儀的不銹鋼管路、進(jìn)樣器襯管等對有機胺等含氮的堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出的靈敏度降低。通常采用弱極性色譜柱或經(jīng)堿處理過(guò)的色譜柱分析含氮的堿性有機溶劑，如果采用胺分析專(zhuān)用柱進(jìn)行分析，則效果更好。
2.3 供試品和對照品的制備
頂空進(jìn)樣方法通常以水為溶劑，對于非水溶性的藥物，可采用DMF、DMSO或其他適宜溶劑。溶液直接進(jìn)樣方法用水或合適的溶劑溶解樣品。
制備供試品的溶劑的選擇應兼顧供試品和被測有機溶劑的溶解度，且所用溶劑應不干擾被測有機溶劑的測定。水是首選溶劑，特別是頂空進(jìn)樣系統。因為水中不含有機溶劑，故干擾較少，且在FID檢測器上，以水為溶劑時(shí)，各殘留溶劑的靈敏度最高。當藥物不溶于水時(shí)，可加入適當的酸或堿以增加藥物的溶解度，最好選用不揮發(fā)的酸或堿。以DMSO等為溶劑時(shí)，可加入一定量的水以增加檢測的靈敏度，或用鹽析的方法增加靈敏度。測定含氮的堿性溶劑時(shí)，供試品溶液應不呈酸性，以免被測物與酸反應后不易汽化。
對照品的制備方法應與供試品的制備方法相同。在申報資料中發(fā)現對照品（溶液）為直接進(jìn)樣，供試品則為固體直接頂空進(jìn)樣，供試品和對照品不但制備方法不同，而且進(jìn)樣方法和進(jìn)樣量也不同，無(wú)法進(jìn)行比較。提請申報單位注意。
2.4 供試品溶液和對照品溶液濃度的確定
配制供試品溶液的濃度應滿(mǎn)足定量測定的需要，一般供試品取樣量在0.1～1g之間。限度檢查時(shí)對照品溶液的濃度可按規定的限度配制，定量測定時(shí)按實(shí)際殘留量配制，濃度相差最好以不超過(guò)2倍為宜。2.5 檢測器的選擇
一般選用FID檢測器，對含鹵素的有機溶劑如氯仿等，采用ECD檢測器可得到更高的靈敏度。
通?？筛鶕幬锶軇┑臍埩羟闆r選擇合適的檢查方法。當需要檢查的有機溶劑數量不多，且極性差異較小時(shí)，可選擇毛細管色譜柱-頂空進(jìn)樣-等溫法。當需要檢查的有機溶劑數量較多，且極性、沸點(diǎn)差異較大時(shí)，可選擇毛細管色譜柱-頂空進(jìn)樣-程序升溫法；也可選擇填充柱或適宜極性的毛細管柱直接進(jìn)樣法。
限度檢查（一類(lèi)、部分二類(lèi)溶劑）時(shí)采用內標法或外標法；定量測定（含量超過(guò)0.1%的二類(lèi)或需要定量控制的三類(lèi)溶劑）時(shí)采用內標法或標準加入法。
頂空進(jìn)樣法還要對頂空溫度和頂空時(shí)間進(jìn)行選擇。
頂空溫度應根據溶解供試品溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇。以水為溶劑及測定低沸點(diǎn)殘留溶劑時(shí)，頂空溫度不宜超過(guò)85℃；測定沸點(diǎn)較高的殘留溶劑時(shí)，通常選擇較高的頂空溫度；但此時(shí)應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物干擾測定結果。以DMSO為溶劑時(shí)，頂空溫度不宜超過(guò)115℃。例如，在申報資料中發(fā)現，以水為溶劑，頂空溫度為100℃，柱溫60℃，結果高濃度的乙腈比低濃度的二氯甲烷的峰面積還小，原因是頂空溫度太高，大量的水被蒸發(fā)（或濃度被稀釋?zhuān)?，隨著(zhù)水蒸汽的凝結，在水中溶解度大的乙腈的靈敏度下降，產(chǎn)生了與事實(shí)不符的實(shí)驗結果。
頂空時(shí)間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達到平衡，一般通過(guò)測定頂空時(shí)間與頂空氣體濃度的濃度時(shí)間曲線(xiàn)來(lái)確定。頂空時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，一般為30～45分鐘，如果超過(guò)60min，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導致定量的準確性降低。如果平衡時(shí)間選擇10分鐘，就不能保證氣-液兩相達到平衡。
注意對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。
甲酰胺、2－甲氧基乙醇、2－乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不適宜用頂空法測定。
3、殘留溶劑檢查方法的驗證（我認為必做用紅色標識）
3.1 系統適用性試驗
柱效：用被測物的色譜峰計算，填充柱法的理論板數應大于1000，毛細管色譜柱的理論板數應大于5000。
分離度：色譜圖中被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應大于1.5。
重復性：以?xún)葮朔y定時(shí)，對照品溶液連續進(jìn)樣5次，所得被測物與內標物峰面積之比的相對標準偏差應不大于5%；以外標法測定時(shí)，所得被測物峰面積的相對標準偏差應不大于10%。
3.2 準確度
在規定的范圍內，至少9個(gè)測定結果。設計三個(gè)不同的濃度進(jìn)行測定，計算回收率和相對標準偏差，含量測定的回收率應大于98%。
進(jìn)行回收率試驗時(shí)，由于采用頂空進(jìn)樣系統，供試品與對照品處于不完全相同的基質(zhì)中，此時(shí)應考慮氣-液平衡過(guò)程中的基質(zhì)效應。標準加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對照品溶液基質(zhì)不同所致的基質(zhì)效應的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性。當標準加入法與其它定量方法的結果不一致時(shí)，應以標準加入法的結果為準。
標準加入法為精密稱(chēng)（量）取被測定的殘留溶劑對照品適量，配制成適當濃度的對照品溶液，取一定量精密加入到供試品溶液中，根據外標法或內標法測定殘留留劑的含量，再扣除加入的對照品溶液的含量，即得供試液溶液中殘留溶劑的含量；或按下式計算殘留溶劑的量。Cx=Cx/[（Ais/Ax）-1]，式中Cx為供試品中組分X的濃度；Ax為供試品中組分X的色譜峰面積；Cx為所加入的已知濃度的被測組分對照品；Ais為加入對照品后組分X的色譜峰面積。
3.3 專(zhuān)屬性
對各種殘留溶劑定位和進(jìn)行混合溶劑的分離度試驗，并附代表性圖譜。
供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn)物易對殘留溶劑的測定產(chǎn)生干擾。如果未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn)物與被測物的保留值相同（共出峰），或熱降解產(chǎn)物與被測物的結構相同（如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇）時(shí)，應通過(guò)試驗排除干擾。對第一類(lèi)干擾，通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統中對相同樣品進(jìn)行測定，比較不同色譜系統的測定結果的方法。如二者結果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾；如二者結果不一致，則表明測定中有共出峰的干擾。對第二類(lèi)干擾，通常要通過(guò)測定已知不含該溶劑的對照樣品來(lái)加以判斷。
3.4 其它
可根據是限度檢查還是定量測定選擇具體的驗證內容。
精密度：重復性和重現性，在規定范圍內，至少9個(gè)測定結果。設計三個(gè)不同的濃度進(jìn)行測定。一般保留時(shí)間的RSD〈1%，峰面積的RSD〈5%。
線(xiàn)性：至少制備5個(gè)濃度，R=0.99。附回歸方程、相關(guān)系數和線(xiàn)性圖。
檢測限和定量限：檢測限為信噪比3：1或2：1時(shí)相應濃度或注入儀器的量。定量測定時(shí)需驗證定量限，其限度為信噪比10：1時(shí)相應濃度或注入儀器的量。同時(shí)說(shuō)明測試的過(guò)程和結果，并附圖譜。
網(wǎng)友aland：
殘留溶劑是藥品質(zhì)量控制中一個(gè)重要的內容。殘留溶劑檢查方法選擇是否合理直接關(guān)系到結果的準確性。下面我就有機殘留溶劑檢查方法合理性的幾點(diǎn)考慮及重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題進(jìn)行分析和討論。
原料藥或制劑中有機溶劑的殘留量一般要求控制在幾個(gè)至幾千個(gè)ppm之間，屬于微量或痕量測定，與常量測定有著(zhù)不同的特點(diǎn)。殘留溶劑檢查方法的選擇對測定結果有著(zhù)重要的影響，有時(shí)采用不同的方法測定同一個(gè)樣品會(huì )得到截然不同的結果。通過(guò)最近觀(guān)察一段時(shí)間情況，經(jīng)常發(fā)現在殘留溶劑的檢查方法尚不合理的情況下，若樣品的色譜圖中未出現溶劑峰，也未經(jīng)其它系統驗證，就簡(jiǎn)單地作出樣品無(wú)該溶劑殘留的結論，進(jìn)而不將其殘留定入質(zhì)量標準，藥檢所也不再進(jìn)行復核。針對這種情況，就如何評價(jià)殘留溶劑檢查方法的合理性談自己的一些認識，與各位業(yè)內同仁交流。
有機殘留溶劑檢查一般采用氣相色譜法，評價(jià)色譜系統的適用性和方法學(xué)驗證資料遵循與液相色譜方法評價(jià)相同的原則，不再贅述。與液相方法不同的是，氣相色譜有多種進(jìn)樣方式，殘留溶劑檢查常用直接進(jìn)樣法或頂空進(jìn)樣法。針對這兩種進(jìn)樣方法不同的特點(diǎn)，評價(jià)方法合理性的要點(diǎn)應有所不同。
對于直接進(jìn)樣法，應著(zhù)重評價(jià)方法的靈敏度和重復性。目前已普遍用毛細管柱取代填充柱，因為毛細管柱的柱效高，其靈敏度也較填充柱大為提高。但由于毛細管柱直接進(jìn)樣的體積小，一般僅幾微升，即使提高供試溶液的濃度，對于測定限量極低的溶劑（如：苯、四氯化碳、1，2-二氯乙烷等）及對FID檢測器響應低的溶劑（如：含氯的溶劑），其檢測限一般接近或高于限量，靈敏度難以滿(mǎn)足測定的需要。測定此類(lèi)溶劑最好采用頂空進(jìn)樣法，對含鹵素的溶劑可改用電子捕獲檢測器（ECD）。進(jìn)樣量小也易造成進(jìn)樣重復性差，采用內標法較外標法的結果更為準確。
頂空進(jìn)樣法是將大量樣品中的殘留溶劑富集在頂空瓶上層的氣體中，對絕大多數有機溶劑而言，靈敏度較直接進(jìn)樣法大為提高，但頂空進(jìn)樣系統中存在氣液兩相的平衡問(wèn)題，對結果準確性的影響因素增多。評價(jià)方法是否合理，應著(zhù)重關(guān)注以下三個(gè)方面：（1）頂空條件：頂空瓶的平衡溫度和時(shí)間是最重要的參數，根據溶解樣品的溶劑和待測溶劑的不同性質(zhì)，達到氣液平衡所需的溫度和時(shí)間可能不同，應有試驗數據作為選擇的依據，但在申報資料中一般都未提及。判斷頂空條件是否適用，一般的規律是：頂空瓶的平衡溫度應低于溶解樣品所用溶劑的沸點(diǎn)10℃以下，能滿(mǎn)足檢測靈敏度即可；對于沸點(diǎn)過(guò)高的溶劑，如DMF、DMSO、聚乙二醇等，用頂空進(jìn)樣測定的靈敏度不如直接進(jìn)樣，不適宜采用頂空法；頂空瓶的平衡時(shí)間一般應為30至60分鐘，才能保證氣液兩相達到穩態(tài)平衡。（2）供試品和對照品是否平行：由于供試品和對照品的液體部分狀態(tài)不完全一致而造成的基質(zhì)效應會(huì )直接影響到結果的準確性。采用標準加入法可以消除基質(zhì)效應，但目前在國內的申報資料中較少見(jiàn)到，其原因可能是方法較為繁瑣，且需要消耗大量的樣品，對新藥研發(fā)初期樣品量較少的情況或一些貴重的藥品不太適用。如果申報資料中提供了回收率數據，就容易判斷基質(zhì)效應的大小，但由于目前對此沒(méi)有強制要求，大多數資料都未對回收率進(jìn)行研究。因此在評價(jià)方法時(shí)，至少應要求對照品和供試品采用相同的溶劑溶解，且液體部分的體積應完全一致。（3）重復性：由于頂空進(jìn)樣法存在氣液平衡和氣體進(jìn)樣的問(wèn)題，粗放度較大，中國藥典2005年版的要求是：內標法連續五次進(jìn)樣的相對標準偏差小于5％，外標法的相對標準偏差小于10％；歐洲藥典則要求相對標準偏差小于15％，因此重復性應密切關(guān)注。
此外，無(wú)論是直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣，都應盡量使供試液中的樣品完全溶解，否則當殘留溶劑被包裹在樣品晶格中時(shí)就不能被檢測出來(lái)，可能造成結果與實(shí)際情況完全不符。對溶解性差的樣品，可采用不揮發(fā)性酸或堿的溶液、高沸點(diǎn)的有機溶劑、混合溶劑等來(lái)溶解樣品，即使樣品在加熱的條件下可能被破壞，只要待測的殘留溶劑不被破壞（如：測定酯類(lèi)溶劑不能采用酸或堿溶液，以免發(fā)生分解）且樣品的熱分解產(chǎn)物不影響測定，那么方法也是可以認可的。如果確實(shí)有一些藥物采用上述條件都不能達到溶解，則可考慮采用充分研磨或超聲的方法破壞藥物的結構，使其中的殘留有機溶劑釋放出來(lái)，當然，這種情況下一般應注意進(jìn)行相應的方法學(xué)驗證以確定方法的可行性。
在國外藥典中，對殘留溶劑檢查的規定有所不同，其中以歐洲藥典對殘溶檢查的要求最為嚴格，它建立了兩個(gè)極性不同的色譜系統，對色譜系統的選擇、色譜條件、溶液的配制方法、系統適用性試驗、方法學(xué)驗證等都作了詳細的規定，以保證樣品中所有的殘留溶劑都能被逐一的、準確的檢測出來(lái)，避免發(fā)生遺漏的情況；根據樣品的具體情況選用其中一個(gè)系統測定后，還必須用另一系統加以驗證，以保證結果的正確性。歐洲藥典的殘溶檢查方法看似繁瑣、呆板，但在其嚴謹、嚴格的框架下，結果的可信度、準確度、專(zhuān)屬性、耐用性大大提高，值得我們研發(fā)者借鑒。
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