1 Sephadex LH20是一種價(jià)錢(qián)較高的填料，使用請千萬(wàn)注意，很貴的喲?。ó斎?，老板有錢(qián)就另當別論拉）
2 先講Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過(guò)濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過(guò)濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來(lái)，小分子的化合物保留強，最后出柱。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH20對化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來(lái)，極性小的化合物保留強，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過(guò)濾作用來(lái)分離。
3 再講Sephadex LH20 洗脫溶劑。聽(tīng)我講完 第2點(diǎn)后，其實(shí)就應該清楚Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類(lèi)：反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫，以甲醇－－水系統最為常見(jiàn)，先用水，逐漸增加甲醇比例，最后用100％甲醇沖柱。正相系統以氯仿－－甲醇最為常見(jiàn)，先用50％氯仿－－甲醇，逐漸增加甲醇比例，最后用100％甲醇沖柱。
4 接下來(lái)講樣品的處理和洗脫溶劑的選擇。如果樣品極性大，這選用反相溶劑洗脫（甲醇－－水），樣品用最少體積的甲醇－－水（盡可能甲醇少一些）溶解，過(guò)濾后，濕法上樣（一定要濾喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得將Sephadex LH20 的柱頭部分棄去，很心痛呀）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯仿－－甲醇），樣品用最少體積的氯仿－－甲醇溶解，過(guò)濾后，濕法上樣。
5 分離的技巧，最后說(shuō)說(shuō)我的使用心得
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所謂欲速則不達。
（2）柱子盡可能長(cháng)， Sephadex LH20 柱長(cháng)的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力，打擊敵人。
（3） 餾分一定要接的細，可1／10，或1／20 個(gè)保留體積接成一餾分。
（4） 洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積，對特殊保留強的化合物，可洗脫5個(gè)保留體積。
（5）鞣質(zhì)成分死吸附嚴重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)
（6）Sephadex LH20 對黃酮類(lèi)成分的分離效果極佳，方法很成型，有大量文獻參考。
（7）填料反復使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái)，待用
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