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在很久很久以前，年輕的Piotr Chomczynski老爺爺和Nicoletta Sacchi老奶奶在美國NIH大院里相遇，互相感慨科研經(jīng)費不好拿啊，儀器設備都貴啊，咱得省著(zhù)點(diǎn)花錢(qián)啊，于是兩人一合計，發(fā)明了簡(jiǎn)單便宜的TRizol抽提RNA的方法（Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. 1987. Analytical Biochemistry）。正是因為他們的發(fā)明讓RNA抽提迅速簡(jiǎn)便，從此開(kāi)啟了RNA研究的熱潮。
Nature Protocols曾高度評價(jià)這個(gè)偉大發(fā)明“大大加快了RNA相關(guān)研究的進(jìn)程，并使non-coding RNAs的發(fā)現成為可能”。
現在我們所熟知的TRIzol是Life Technologies公司的商品名，而同樣的試劑在Piotr Chomczynski老爺爺創(chuàng )辦的MRC公司則被命名為RNAzol（據Piotr Chomczynski老爺爺自己透露，他們已經(jīng)將RNAzol改進(jìn)，使抽提得到的RNA無(wú)基因組DNA殘留）。事實(shí)上，這種RNA抽提的方法應該叫做“異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法”。
TRIzol作用原理：
在勻質(zhì)化或溶解樣品中，TRIzol試劑可保持RNA的完整性，同時(shí)能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分離成水相和有機相。RNA存在于水相。水相轉移后，RNA通過(guò)異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇沉淀可從中間相得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質(zhì)。
需自備的耗材試劑：
RNase free的一次性帶蓋透明聚丙烯管（比如AXYGEN的1.5ml EP管，RNase free的，可以拆包即用。話(huà)說(shuō)，我要不要問(wèn)AXYGEN收廣告費啊╮(╯▽╰)╭？）
RNase free的槍頭（比如AXYGEN的RNase free的槍頭，有盒裝的和袋裝的，拆包即用）
RNase free玻璃瓶：玻璃瓶200°C烘烤2h即可去除RNase，塑料瓶蓋可浸泡10分鐘的0.5 M NaOH溶液，然后用RNase free水徹底沖洗，并高壓蒸汽滅菌。
氯仿（國產(chǎn)分析純的即可，比如國藥集團產(chǎn)的）
異丙醇（國產(chǎn)分析純的即可）
RNase free水：即DEPC treated水。把水加入RNase-free玻璃瓶中，加入0.1%（v/v）DEPC用力搖勻，37°C過(guò)夜，高溫高壓滅菌。滅菌時(shí)瓶口需擰松，DEPC受高溫會(huì )分解出大量CO2，注意安全！
75%乙醇（無(wú)水乙醇溶于RNase free水中）
簡(jiǎn)明抽提流程：
裂解
a) 新鮮取材的組織液氮急凍后，每 50-100mg組織加1ml TRIzol，使用強力勻漿機勻漿；
b) 貼壁細胞則棄培養基后每87.5px皿中加入TRIzol試劑1ml吹打裂解；
c) 懸浮細胞則離心沉淀細胞棄培養基，每5-10×106個(gè)細胞中加入1ml TRIzol吹打裂解。
Tips：使用TRIzol試劑前避免洗滌組織和細胞，因為這增加了mRNA降解的可能性。
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室溫孵育5-10min
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每1ml TRIzol中加200ul氯仿，用手大力搖管15s，
室溫孵育2-3min
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2-8°C、12000 g×15min
離心后，混合物分離為下層紅色的酚-氯仿相、中間相以及上層無(wú)色水相。RNA存在于水相。
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轉移水相到一個(gè)新管，加入500ul異丙醇上下顛倒混勻，室溫孵育10min
Tips：轉移水相時(shí)，槍尖隨著(zhù)液面下移而下移，避免擾亂分層，慢慢吸取，避免吸到中間相和下層有機相，更不要貪心吸太多，吸大約400ul就好。
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2-8°C、12000 g×10min
往往離心前RNA不可見(jiàn)，離心后再管側面和底部形成白色沉淀
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棄上清，1ml 75%乙醇洗滌一次，2-8°C、7500 g×5min
Tips：加入75%乙醇時(shí)輕輕加進(jìn)去就好，盡量不要把RNA沉淀吹散，把沉淀保持在原位最好了，因為有時(shí)候RNA太少，吹散了再離心下來(lái)時(shí)RNA碎片不一定能聚集到一起形成肉眼可見(jiàn)的沉淀，導致后面的“盲操作”。而不小心吹散的話(huà)也沒(méi)關(guān)系，對RNA質(zhì)量不會(huì )有影響。
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盡量吸除上清，室溫干燥5-10min，以RNase free水溶解，并保存于-70°C
Tips：密切注意RNA沉淀的干燥程度，不要完全干燥，這將大大降低其溶解度。部分溶解的RNA其A260/280比值會(huì )偏低。最佳干燥度為RNA沉淀仍然是白色的，微微濕潤呈啫喱狀。
OK，搞定！
附言：貓大一直堅信，只要一直奔跑，那一邊就是天涯海角！小伙伴們，跟貓大一起加油吧?。?！#￣▽?zhuān)?)
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