乙肝疫苗的國內外現有研究，除多肽類(lèi)疫苗是在表位識別水平外，其余的都是在蛋白大分子水平上。此外，無(wú)論是蛋白疫苗、DNA疫苗還是多肽類(lèi)疫苗，都是集中在天然抗原選擇搭配，難以克服天然抗原的免疫弱勢和蛋白大分子的免疫偏差和免疫顛覆，同時(shí)也沒(méi)有取得治愈的突破性進(jìn)展。
吳玉章首創(chuàng )了表位識別的氨基酸密碼學(xué)說(shuō)和模擬抗原的分子設計理念，來(lái)克服天然抗原的免疫弱勢和蛋白大分子的免疫偏差和免疫顛覆。該學(xué)說(shuō)和理念在乙肝項目的實(shí)踐和試驗中得到了驗證。該項目臨床前期的相關(guān)實(shí)驗效果很好。
通過(guò)對乙肝免疫耐受的機理、相關(guān)免疫識別理論（表位生物學(xué)、氨基酸密碼學(xué)說(shuō)）、免疫信號傳遞和免疫效應執行有關(guān)的Th1/Th2細胞極化、Th1/Th2細胞極化與CTL效應的關(guān)系、CTL免疫識別和效應、基于表位的疫苗設計路線(xiàn)（EBVD）、治療用（合成肽）乙肝疫苗的設計和實(shí)驗情況等相關(guān)內容的研究。我們認為該疫苗的設計路線(xiàn)新穎，理論可靠性高，具有很高的實(shí)用價(jià)值，能夠打破乙肝免疫耐受，徹底清除乙肝病毒。
吳教授提出的氨基酸密碼學(xué)說(shuō)和模擬抗原分子設計理論，除乙肝之外，還對免疫系統出現偏差的許多疾病都是可以應用的。因此該技術(shù)還有很多的應用前景。例如：糖尿病、腫瘤等與免疫系統不作為有關(guān)的疾病。
預計06年的EPS約為0.45元（股改前股本），鑒于治療性乙肝疫苗發(fā)展空間，和相關(guān)技術(shù)的廣闊應用前景，以及進(jìn)入療效檢測的關(guān)鍵時(shí)期，我們建議投資者在合理的風(fēng)險承受范圍內，買(mǎi)入該公司股票。
一：啤酒行業(yè)概況眾所周知，啤酒是世界上產(chǎn)銷(xiāo)量最大的酒類(lèi)飲料。近年來(lái)，中國居民的飲酒習慣正在發(fā)生深刻的改變，傳統的白酒（尤其是低端白酒）日漸淡出，啤酒已經(jīng)占據國內酒類(lèi)市場(chǎng)的半壁江山。改革開(kāi)放二十多年來(lái)中國啤酒工業(yè)迅猛發(fā)展，從1987年到1994年國內啤酒年產(chǎn)量均增幅在20%以上，最高時(shí)達到30%以上，1995年以來(lái)我國啤酒產(chǎn)量增長(cháng)速度放慢，但年均增幅仍達到7%以上。啤酒行業(yè)已成為中國釀酒業(yè)中發(fā)展最快、規模最大的子行業(yè)。目前我國啤酒行業(yè)在經(jīng)歷了激烈的市場(chǎng)競爭和行業(yè)整合后,產(chǎn)業(yè)集中度發(fā)生了很大變化,企業(yè)數量從上世紀90年代的900戶(hù)減少到500戶(hù)左右,2005年前10名企業(yè)就占了61%的份額。經(jīng)過(guò)近十年的兼并整合，龍頭企業(yè)的市場(chǎng)占有率逐年提高，我國啤酒業(yè)集中度得到了進(jìn)一步的提高，進(jìn)入了區域寡頭壟斷時(shí)代。
2004年中國人均啤酒消費量21.5公升，中國消費總量達2870萬(wàn)噸。經(jīng)歷了去年的“甲醛風(fēng)波”后，中國啤酒年產(chǎn)量仍然達到３１８９萬(wàn)噸，實(shí)現連續４年穩居世界第一，成為名副其實(shí)的啤酒生產(chǎn)大國。到２００５年年底，中國年人均消費啤酒已達24.4升，接近世界平均水平的26升，但和啤酒發(fā)達國家動(dòng)輒上百升的人均消費量相比，還有很大的發(fā)展潛力。到今年５月底，中國已產(chǎn)銷(xiāo)啤酒1240.76萬(wàn)噸，同比增長(cháng)15.4％，好于往年。而６～１０月正是啤酒旺季，今年對中國啤酒產(chǎn)業(yè)而言又是一個(gè)豐收年。
近幾年來(lái)，我國啤酒行業(yè)正在逐漸告別惡性競爭時(shí)代，行業(yè)集中度逐年提高，行業(yè)尤其是行業(yè)龍頭企業(yè)的發(fā)展面臨較好機遇。預計未來(lái)幾年內，我國啤酒市場(chǎng)將繼續保持年均5～8％的成長(cháng)速度，大大高于歐美等國家成熟啤酒市場(chǎng)的年均約1％～2％的成長(cháng)速度，繼續成為世界上最具吸引力和最具潛力的啤酒市場(chǎng)。而重慶啤酒作為我國啤酒第二方陣的領(lǐng)軍企業(yè)，預計其將繼續獲得比行業(yè)更高的成長(cháng)性。
二：公司啤酒業(yè)務(wù)分析1．公司啤酒業(yè)務(wù)的現狀國家經(jīng)貿委負責人曾以“北有燕京、南有珠江、東有青島、西有重啤“來(lái)肯定重啤在全國同行業(yè)中的重要地位。1993年5月25日，重慶啤酒集團將下屬的核心企業(yè)——重慶啤酒廠(chǎng)改組，發(fā)起設立了重慶啤酒股份有限公司，1997年10月在上海交易所上市，重慶啤酒股份公司也因之承繼了公司的大部分啤酒主營(yíng)并成為集團公司在啤酒領(lǐng)域的旗艦。目前集團公司擁有24家公司，生產(chǎn)能力突破280萬(wàn)噸。
經(jīng)過(guò)近幾年的擴張和整合，公司啤酒業(yè)務(wù)進(jìn)入了收獲期。為公司啤酒業(yè)務(wù)走向全國奠定了很好的基礎。公司主營(yíng)啤酒業(yè)務(wù)近幾年保持良好的發(fā)展態(tài)勢，主營(yíng)收入呈現快速發(fā)展態(tài)勢，從1999年～2004年五年間公司主營(yíng)收入平均復合增長(cháng)率達到32.60％，其中近三年平均復合增長(cháng)率更是高達38.90％，公司主營(yíng)收入的高速增長(cháng)主要是因為公司近幾年來(lái)為了拓展其啤酒業(yè)務(wù)的未來(lái)發(fā)展空間，在穩固重慶本地市場(chǎng)的基礎上，加大了對外地市場(chǎng)的擴張力度，最近一次收購完成后，公司的啤酒產(chǎn)能已超過(guò)100萬(wàn)噸/年，基本上能夠滿(mǎn)足現有市場(chǎng)的需要。雖然還不能與青島啤酒和燕京啤酒等行業(yè)第一集團軍的規模相比，但作為地域品牌，重慶啤酒的規模劣勢已經(jīng)大大降低，具備了較強的抗風(fēng)險能力和進(jìn)一步擴張的潛力。
公司在２００２年至２００５年啤酒產(chǎn)量以每年３０％左右的幅度增長(cháng)，而凈利潤則始終保持與規模同步增長(cháng)，直到今年上半年加速增長(cháng)，公司啤酒業(yè)務(wù)06年的二季度產(chǎn)量增長(cháng)了20％，收入增加了30％，利潤增長(cháng)了35％。半年度的業(yè)績(jì)增長(cháng)達到50%以上。?？v觀(guān)國內啤酒行業(yè)的擴張，大多數是規模擴張的同時(shí)效益會(huì )不同程度受到影響。“重啤式擴張效應”實(shí)屬難得。公司06年上市公司的產(chǎn)量將會(huì )達到100萬(wàn)噸左右，集團有280萬(wàn)噸的產(chǎn)能。公司產(chǎn)品的市場(chǎng)占有率為：（1）、西南市場(chǎng)：公司產(chǎn)品市場(chǎng)占有率約45%，其中重慶市場(chǎng)占有率達80%以上，四川市場(chǎng)占有率達20%以上。（2）在華東一帶的江蘇市場(chǎng)占有率達30％以上，浙江市場(chǎng)占有率達15%以上，安徽市場(chǎng)占有率達30%以上。（3）華中市場(chǎng)：公司產(chǎn)品市場(chǎng)占有率約10%。公司已經(jīng)從區域性啤酒企業(yè)向全國性啤酒企業(yè)的發(fā)展方向上邁出了較大的一步。
從公司上市以來(lái)的業(yè)績(jì)數據可以看出公司啤酒業(yè)務(wù)的發(fā)展軌跡，在2000年到2003年的擴張期間，除了01年以外，公司的主營(yíng)收入、凈利潤同步出現增長(cháng)。特別是在04年和05年公司擴張后的整合效果開(kāi)始體現，凈利潤的增長(cháng)開(kāi)始追上主營(yíng)收入的增長(cháng)速度。公司啤酒業(yè)務(wù)06年的二季度產(chǎn)量增長(cháng)了20％，收入增加了30％，利潤增長(cháng)了35％。06年凈利潤的增長(cháng)已經(jīng)超過(guò)主營(yíng)收入增長(cháng)率。顯示公司啤酒業(yè)務(wù)的良好發(fā)展趨勢。
2．公司啤酒業(yè)務(wù)的發(fā)展前景啤酒行業(yè)在基本完成一輪并購和整合之后，國內大型啤酒企業(yè)已經(jīng)具有了提高品牌競爭力所必須的規模優(yōu)勢。這僅僅是一個(gè)必要條件，面對來(lái)勢洶洶的國際巨頭，國內企業(yè)必須借鑒國內外先進(jìn)經(jīng)驗，建立和完善中國現代化的釀造裝備行業(yè)技術(shù)創(chuàng )新體系裝備制造和管理創(chuàng )新體系，以適應啤酒工業(yè)向產(chǎn)業(yè)化方向健康發(fā)展的需要。所以，各啤酒企業(yè)在迎接國際巨頭和業(yè)內同行的競爭過(guò)程中，細節將會(huì )決定成敗。從下面的主要上市公司噸酒收入和噸酒利潤的圖表中，我們可以看出，公司的噸酒收入02年到05年分別是2096.12元、2124.76元、2063.68元、2074.55元。而同期的青島啤酒要略勝于重慶啤酒基本上維持在2400元左右。燕京啤酒的噸酒收入維持在1700元左右?；萑【频膰嵕剖杖刖S持在2100元左右，但是05年它的噸酒收入下降到了2000元一下。在噸酒的主營(yíng)利潤方面，重慶啤酒的優(yōu)勢開(kāi)始有所擴大，公司近四年的噸酒平均主營(yíng)利潤為736.80元，分別高于燕京啤酒和惠泉啤酒的448.15元、422.42元。與青島啤酒的752.73元比較接近。同時(shí)我們單看05年重慶啤酒是679.68元，而燕啤、青啤、惠泉分別為474元、767元、374元。
而噸酒的凈利潤方面重啤以115.85元高居榜首，其次是燕啤的108元、青啤的78.54、惠泉的73.85元。而在05年他們分別是109元、97元、76元、63元。從噸酒的收入和利潤比較來(lái)說(shuō)，公司在行業(yè)內還是具有很強的競爭力。
在噸酒費用方面，重慶啤酒的財務(wù)費用相對較高，近四年的平均值為66.24元。
燕啤、青啤、惠泉分別為9.41元、24.90元、43.27元。營(yíng)業(yè)費用方面，重慶啤酒近四年的平均值為320.10元。燕啤、青啤、惠泉分別為150.77元、400.67元、151.41元。管理費用方面，重慶啤酒近四年的平均值為209.12元。燕啤、青啤、惠泉分別為158.57元、196.99元、113。47元。在看到平均值之后，我們注意到，雖然重慶啤酒的噸酒三項費用較高，但是他的趨勢是在逐步降低。而其他的三家企業(yè)它們是處于一個(gè)上升的趨勢。同時(shí)應該注意到重慶啤酒在市場(chǎng)不斷擴張中，費用是逐年的下降。說(shuō)明公司的管理績(jì)效在不斷的提高。06年公司業(yè)績(jì)出現的大幅增長(cháng)，從一個(gè)側面印證了我們的分析。
雖然公司噸酒收入和費用指標都是相對處于劣勢，但是公司的噸酒利潤卻是最好的。說(shuō)明公司在原料成本的控制，生產(chǎn)工藝的優(yōu)化和產(chǎn)品結構的調整方面是這幾家公司中最好的，符合目前啤酒工業(yè)的發(fā)展趨勢，即技術(shù)創(chuàng )新和管理創(chuàng )新的企業(yè)將會(huì )在行業(yè)競爭中勝出。通過(guò)公司噸酒收入、利潤和費用與同行業(yè)相比，可以看出，公司的啤酒業(yè)務(wù)處于一個(gè)良好的發(fā)展趨勢。重慶啤酒，在完成了在西南地區的戰略布局后。一舉拿下湖南、江蘇、浙江等地三家較大規模的啤酒廠(chǎng)；接著(zhù)涉足華南、中原、華北市場(chǎng)。目前，重慶啤酒已經(jīng)形成西南、湖南、浙江、江蘇等幾大利潤中心。公司已經(jīng)突破了區域性企業(yè)的地位，具備了與全國性啤酒企業(yè)競爭的實(shí)力。06年公司啤酒業(yè)務(wù)收入與利潤的高增長(cháng)，預示著(zhù)未來(lái)公司啤酒業(yè)務(wù)的將進(jìn)入一個(gè)快速發(fā)展期。
公司生物產(chǎn)業(yè)分析前期報告，我們介紹了公司生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展歷史和現狀，以及治療性乙肝疫苗的相關(guān)情況。由于公司的合成肽治療性乙肝疫苗項目進(jìn)入關(guān)鍵的臨床二期，我們認為有必要就大家最為關(guān)心的治療性乙肝疫苗項目進(jìn)行更為細化的分析。
以下資料主要來(lái)源于有關(guān)乙肝疫苗相關(guān)的研究文獻，吳玉章、邊疆兩位教授"等人"公開(kāi)發(fā)表的相關(guān)研究文獻。本部分的一些結論是本人通過(guò)研究原始文獻得出的。
投資者可以通過(guò)研究原始資料得到自己的結論。
1．治療性乙肝疫苗的研究進(jìn)展目前治療性疫苗，是指能夠打破慢性感染者體內免疫耐受、重建和增強免疫應答的新型疫苗，是抗病毒、抗腫瘤的新型免疫手段。在現階段，關(guān)于乙肝病毒免疫耐受的機理，歐洲學(xué)派認為是樹(shù)突狀細胞不作為，而美國學(xué)派認為是T細胞不作為。
目前在這兩個(gè)方向都有人探索治療性乙肝疫苗。由于CTL(細胞毒性T細胞)和Th1細胞和相關(guān)的細胞因子是清除細胞內病毒的主要手段，所以有學(xué)者集中在提高細胞免疫方面做出了探討。
從治療性乙肝疫苗種類(lèi)來(lái)說(shuō)，目前主要分為蛋白疫苗、多肽疫苗、DNA疫苗這幾大類(lèi)。
蛋白疫苗：大家都是集中在HBsAg作為基礎抗原，通過(guò)重組或者改變抗原提呈方式。以期達到打破機體免疫耐受的目的。由于對乙肝病毒的研究發(fā)現，preS蛋白上具有肝細胞的結合序列和Th（輔助性T細胞）表位能夠增強該蛋白的免疫原性。
對提高免疫應答率和打破免疫耐受有積極作用。Senturk等利用含有preS、CHO細胞來(lái)源的M蛋白組成的GenHevac B疫苗，能夠誘導機體產(chǎn)生抗preS2抗體和抗S抗體，并降低部分慢性乙肝患者血清中的DNA拷貝數，表明GenHevac B疫苗在預防方面優(yōu)于目前的S蛋白預防性疫苗，但是該疫苗不能夠有效的降低免疫耐受患者血清中的病毒DNA拷貝數。而且無(wú)清除或者降低肝細胞內cccDNA(共價(jià)閉合環(huán)狀DNA)含量的證據。
Page M等利用含S(aywz和adw)、preS2-S(preS1 20-47aa ayw+S adw)4種成分的新型多分子疫苗Hepacare。該疫苗的免疫原性更強，在小鼠、大猩猩和人體內都能夠激發(fā)強烈的體液和細胞應答，該疫苗在慢性乙肝患者體內激發(fā)的主要以Th2z細胞因子為主，特異性的CD8+T細胞增殖并不明顯，雖然能夠抑制病毒復制，但是CTLs活性低，依舊不能夠清除肝細胞內cccDNA。治療作用不是很理想[4,5,6]。所以增加preS成分的疫苗雖然提高了機體的免疫應答，但是只是增強了預防效果，對于作為治療性疫苗還是遠遠不夠的。
聞?dòng)衩返妊兄频目乖贵w復合物疫苗是通過(guò)抗-HBs與HBsAg混合后，增強HBsAg的提呈來(lái)誘導免疫應答，消除免疫耐受。目前臨床Ⅱ期試驗基本結束，沒(méi)有有關(guān)治愈的報道。
DNA疫苗：DNA疫苗主要是通過(guò)表達質(zhì)粒載體，持續表達抗原蛋白，反復刺激免疫系統。1990年，wolff通過(guò)試驗證實(shí)了外源基因在體內的轉染和表達，為DNA疫苗的運用奠定了基礎。Davis等通過(guò)給小鼠肌肉注射表達HBsAg的DNA質(zhì)粒，可以誘導小鼠能夠產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫。4－8周出現高滴度的抗-HBs，高水平的CTL和CTL前體細胞在1周內能夠被檢測到，并維持數月之久[7,8]。MegedeJZ等通過(guò)同義突變優(yōu)化抗原基因，提高了疫苗的表達量，激發(fā)了更強烈的體液和細胞免疫反應。DNA疫苗通過(guò)優(yōu)化后可以達到治療性疫苗的要求。激發(fā)高水平的CTL應答。
DNA疫苗免疫效果與質(zhì)粒表達抗原的性質(zhì)、水平和方式都有很大的關(guān)系。另外，進(jìn)入體內的質(zhì)粒是不可控的，它持續地在人體內表達抗原，一旦出現免疫偏差，后果非常嚴重，所以對人體的長(cháng)期副作用還是無(wú)法評價(jià)的，DNA疫苗的安全性問(wèn)題非常大。
多肽疫苗：多肽類(lèi)疫苗的理論基礎是基于抗原分子表為水平的研究。由于蛋白質(zhì)抗原是通過(guò)表位來(lái)體現其免疫特異性，有效的保護性免疫有賴(lài)于一組抗原表位的合理搭配和組合（在吳玉章的多肽疫苗中詳細論述）多肽疫苗去除了抗原蛋白重的無(wú)效序列和免疫抑制序列。剩下的是免疫有效成分，具有高效、針對性強、副作用低的特點(diǎn)。由于表位的錨基序、側翼序列影響表位的親和力和切割提呈效率。因此，在表位優(yōu)化及組合、鏈接方式等研究積累后，多表位多肽疫苗完全可以實(shí)現高提呈效率和應答類(lèi)型的可控。目前多肽類(lèi)疫苗的關(guān)鍵在于期免疫原性太弱。但是可以通過(guò)糖基化、脂質(zhì)修飾和輔以適當的佐劑來(lái)克服。Vitiello A等用CY-1899T細胞疫苗，治療慢性乙肝患者。該疫苗是T細胞相關(guān)表位疫苗。該疫苗包括源于核心抗原（HBcAg）第18～27位的氨基酸組成的CTL表位，源于破傷風(fēng)類(lèi)毒素的T輔助性細胞（Th）表位和兩個(gè)棕櫚酸分子。在26位健康志愿者中進(jìn)行的劑量梯度實(shí)驗顯示出良好的安全性，并且可以誘導核心抗原的CTL反應。在19例慢性乙肝患者注射該疫苗后，誘導的CTL反應只有在健康者體內的十分之一，隨訪(fǎng)中沒(méi)有發(fā)現肝臟生化指標或病毒學(xué)的顯著(zhù)變化。也沒(méi)有發(fā)現嚴重不良事件[10,11]。吳玉章等研制的TT830-843(破傷風(fēng)類(lèi)毒素的T輔助性細胞表位)、HBcAg18-27 CTL細胞表位、PreS218-24的B細胞表位、以及棕櫚酸作為分子內佐劑，和相關(guān)表位的定位后的組成的MAP(multi-antigen peptide)已經(jīng)開(kāi)始臨床二期。預計不久的將來(lái)人們將會(huì )看到該疫苗的治愈效果。
小結：
目前，無(wú)論是蛋白疫苗、DNA疫苗還是多肽類(lèi)疫苗，國內外現有研究開(kāi)發(fā)，主要集中在天然抗原選擇搭配、在預防性疫苗的制劑中添加抗原或抗體的方式。而且除多肽類(lèi)疫苗是在表位識別水平外，其余的都是在蛋白大分子水平上。目前所有的治療性乙肝疫苗沒(méi)有出現有效治愈的案例，沒(méi)有取得突破性的進(jìn)展。吳玉章首創(chuàng )了表位識別的氨基酸密碼學(xué)說(shuō)和模擬抗原的分子設計理念（我們在下面會(huì )詳細介紹），來(lái)克服天然抗原的免疫弱勢和蛋白大分子的免疫偏差和免疫顛覆。2．治療用（合成肽）乙肝疫苗的理論基礎乙肝的感染和自愈自然痊愈的機制是慢性乙肝患者的免疫力增強，提高了Th1細胞活化比率，產(chǎn)生足夠強的細胞免疫反應，徹底清除病毒。雖然，慢性乙肝患者的免疫力弱化，但是由于存在極少數患者通過(guò)自身免疫的增強打破了免疫耐受，為在理論上能夠徹底清除病毒提供了基礎。目前國內外，在這方面的研究探討非常多，希望通過(guò)增強慢性乙肝患者的免疫系統的免疫力，糾正免疫系統的不作為，但是沒(méi)有取得良好的效果。
乙肝病毒進(jìn)入人體后，分為感染急性期和感染慢性期。在感染的急性期，B細胞和T細胞合作共同將病毒殺滅。其中B細胞接受抗原提呈細胞（APC）傳遞的信號，開(kāi)始分泌抗體，最初分泌IgM型抗體，后為IgG型抗體（主要是IgG2a）。產(chǎn)生的抗體與相關(guān)抗原結合后將抗原抗體復合物通過(guò)巨噬細胞和抗原提呈細胞將信號向下傳遞。這就是體液免疫。而免疫系統最終清除病毒的手段是細胞免疫。在急性感染期(a)、Th1細胞大量繁殖以清除病毒，(b)、Th2細胞適量增殖。
當進(jìn)入感染慢性期，Th2途徑調控下的Th1細胞相關(guān)的免疫反應低下，不能殺死所有的肝炎病毒，使得病毒的產(chǎn)生和清除處于平衡狀態(tài)，此時(shí)血清中的肝炎病毒滴度和肝細胞感染指標長(cháng)期存在，病人進(jìn)入了慢性肝炎期。所以，Th1/ Th2細胞活化的失衡導致Th1細胞、和CTL細胞的功能低下，不能夠清除感染病毒的肝細胞，從而機體表現為持續感染狀態(tài)。
免疫力強的患者，通過(guò)感染急性期后，能夠自己痊愈。免疫力弱的患者進(jìn)入感染慢性期后，自愈的概率在1％以下，基本上是認為不可治愈。
乙肝病人的免疫耐受免疫耐受是乙肝慢性化的主要原因之一，表面抗原為分泌性蛋白，在慢性感染者體內，它作為耐受原清除了血清中的活化Th1細胞，使得患者的細胞免疫強度不高。同時(shí)表面抗原的變異也是目前乙肝難以治愈的因素之一。如何在體內啟動(dòng)Th1細胞極化和有效的細胞免疫，來(lái)克服免疫耐受成為關(guān)鍵問(wèn)題。
目前在天然抗原的組合和搭配上進(jìn)行了多年的探索，依然是沒(méi)有取得突破性的近展。主要是由于天然抗原產(chǎn)生的免疫耐受、免疫偏差、免疫顛覆基本上是同時(shí)存在，因此僅僅依靠天然抗原的組合難以解決乙肝病人的免疫耐受。
免疫識別的新理論（表位生物學(xué)、氨基酸密碼學(xué)說(shuō)）
表位生物學(xué)：目前研究表明，蛋白質(zhì)抗原不是通過(guò)它的完整分子來(lái)發(fā)揮功能（與信號傳遞和轉導的機理非常類(lèi)似）。它的特異性是通過(guò)其表位來(lái)體現的。一個(gè)蛋白質(zhì)抗原，它含有多種與免疫識別密切相關(guān)的表位例如：B細胞表位、Th細胞表位、CTL細胞表位等與免疫識別密切相關(guān)的結構，而且還同時(shí)存在毒性或抑制性表位、優(yōu)勢非中和性表位、病理與自身抗原交叉反應性表位等與保護性免疫不利的成分。
人們還認識到在同一蛋白質(zhì)分子的眾多表位中，各表位對抗原性的貢獻不同，有優(yōu)勢表位和非優(yōu)勢表位之分。此外，表位間的相對位置、構像特征、表位側翼序列等也與表位功能的表達密切相關(guān)。
許多研究發(fā)現，天然蛋白抗原在激發(fā)免疫反應時(shí)，不能夠滿(mǎn)足清除病原體的需要，主要是由于隱匿的保護性表位功能未能夠表達。因而所引發(fā)的保護性免疫不夠強大。二是所引發(fā)的免疫反應發(fā)生了免疫偏差（deviation），甚至造成T、B細胞之間、T細胞亞群之間互相殘殺，從而加重感染。因此，對于抗原性的研究需要從天然抗原整個(gè)分子水平向表位水平過(guò)渡。進(jìn)入表位水平后，同一表位內氨基酸殘基對抗原性的貢獻也不同，此外表位內氨基酸的組成和順序決定了抗原的特異性?，F代保護性免疫理論認為：有效的保護性免疫來(lái)源于一組表位的合理組合與搭配。
免疫原由天然蛋白大分子向亞單位、表位多肽水平過(guò)渡后，分子量變小了，所引發(fā)的免疫應答的特異性和針對性增強了。并且擺脫了抑制性和毒性表位的影響。在分子量減小和特異性增強的同時(shí)，也產(chǎn)生出新的問(wèn)題。一是分子量減小，造成抗原性和免疫原性的降低，從而不能激發(fā)滿(mǎn)意的保護性免疫反應。二是修改和重新搭配后的表位所組成的短肽分子能否在體內得到正確的呈遞？
通過(guò)國際上許多實(shí)驗室通過(guò)對上千種不同抗原進(jìn)行的免疫識別研究，積累了豐富的表位研究資料。關(guān)于提高免疫原性，目前形成了兩條思路。1、恢復短肽分子的生物大分子的特性。通過(guò)采用多分枝抗原系統、融合蛋白設計等。2、設計更有效的免疫原分子。如脂質(zhì)肽分子、T、B細胞表位或多表位嵌合體、分子內佐劑疫苗的設計等。
有關(guān)短肽分子能否在體內得到正確呈遞的問(wèn)題，近年來(lái)也引起了許多實(shí)驗室的關(guān)注?？乖蔬f的研究進(jìn)展很快，除了有MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ及MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類(lèi)似物呈遞途徑外，還有CD1呈遞和直接呈遞等多種方式。從傳統的表位概念來(lái)看，CD1呈遞和直接呈遞尚缺乏尋找表位的方法。另外，單純的多肽抗原在體外能有效的激活CTL細胞，但在體內則無(wú)此反應。據文獻報道，加入脂類(lèi)基團能夠有希望解決這一問(wèn)題。
氨基酸密碼學(xué)說(shuō)：吳玉章根據實(shí)驗發(fā)現和理論推算，提出了免疫識別過(guò)程中蛋白質(zhì)抗原以其氨基酸殘基的組合和搭配而形成“識別碼”的學(xué)說(shuō)。認為蛋白質(zhì)的抗原性主要由其側鏈組合形式?jīng)Q定，推斷識別碼的大小約為15個(gè)氨基酸。該學(xué)說(shuō)對指導今后的免疫識別研究和新型疫苗設計具有指導意義。
該學(xué)說(shuō)的主要觀(guān)點(diǎn)：1、蛋白質(zhì)抗原性由組成蛋白質(zhì)的氨基酸順序所決定。2、氨基酸順序本質(zhì)上是氨基酸側鏈的排列和組合方式。因為多肽鏈的主鏈結構都是相同的，側鏈的組合方式直接決定了肽鏈的親（疏）水性、帶電情況、可及性、動(dòng)性及空間構像等，這些特征與蛋白質(zhì)的抗原性有關(guān)，屬于間接相關(guān)。3、由氨基酸殘基組成的“識別碼”在順序上應是宿主自身分子所沒(méi)有的，以保證區分“自我”與“非我”而不引發(fā)自身免疫反應。4、為構成有效的“識別碼”，蛋白質(zhì)抗原不受自然氨基酸順序限制，即可以有交疊順序或間斷順序通過(guò)肽鏈折疊形成。5、不同的氨基酸殘基在抗原識別過(guò)程中可能有相同的貢獻。有可能根據氨基酸殘基的抗原性進(jìn)行分類(lèi)。6、有效區分“自我”、“非我”的識別碼大小是15個(gè)氨基酸殘基。
大于15個(gè)殘基的識別碼引發(fā)高動(dòng)力型免疫應答；小于15個(gè)殘基的識別碼原則上只引發(fā)低張力“聯(lián)系”，且殘基數越少張力越低，引發(fā)自身反應的可能性越大。7、根據抗原性分類(lèi)的氨基酸殘基是形成識別碼的基本密碼。8、識別碼免疫原性的表達還有賴(lài)于其所處分子內的環(huán)境，如B細胞表位、T細胞表位、MHC限制位間的相對位置及其間隔順序等。
在文獻中，有關(guān)該學(xué)說(shuō)的提出進(jìn)行了詳盡的論述，主要思想是根據20種氨基酸的抗原指數，以及氨基酸的理化性質(zhì)和抗原表位相關(guān)的統計，抗原抗體結合的分子機理，相關(guān)試驗數據和經(jīng)驗，提出了該學(xué)說(shuō)，該學(xué)說(shuō)在吳教授的研究中也得到了實(shí)踐的驗證。疫苗設計的基礎和方法從Jenner開(kāi)始，研制疫苗就是模擬天然感染過(guò)程，對于預防性疫苗已經(jīng)取得了很大的成功，為人類(lèi)抵抗感染性疾病做出了重大貢獻。近來(lái)的研究表明模擬自然感染過(guò)程的策略，往往不能夠制備出高效的疫苗，這不單歸因于細胞免疫比體液免疫更為重要，而且發(fā)現1.天然病原體的感染會(huì )通過(guò)其“不合理”的表位組分引起Th1/Th2平衡改變而繼發(fā)免疫偏差、免疫缺陷或通過(guò)引發(fā)免疫活性細胞間的“互相殘殺”的機制加重感染過(guò)程和病理過(guò)程。2.由于進(jìn)化的原因，天然病原體或抗原上含有各種不同的細胞因子、補體或化學(xué)趨化因子受體等高同源性順序，從而干擾細胞間通訊，產(chǎn)生免疫顛覆。病原體通過(guò)這些機制逃避機體的免疫清除，而導致病原體攜帶狀態(tài)或持續感染狀態(tài)。因此新一代疫苗必須能夠誘發(fā)出在性質(zhì)和強度上與自然感染過(guò)程又所不同的免疫反應，所以就有了目前各種天然抗原的組合疫苗。
但是，天然抗原的組合并沒(méi)有獲得很大的進(jìn)展。隨著(zhù)模擬表位的發(fā)現，吳教授提出了模擬抗原的概念。在乙肝疫苗的設計中提出了模擬抗原代替天然抗原的思路。
作為治療用（合成肽）乙肝疫苗，它的理論基礎就是免疫識別新理論的表位生物學(xué)，氨基酸密碼學(xué)說(shuō)。此外，通過(guò)吳玉章自創(chuàng )的基于表位的疫苗設計路線(xiàn)（EBVD）
來(lái)實(shí)現以上理論指導下的乙肝疫苗設計。
該類(lèi)疫苗根據現代免疫抗原提呈理論、治療機理的獨創(chuàng )性和可行性，主要是通過(guò)結構化學(xué)、計算機模擬配對技術(shù)。經(jīng)過(guò)分子設計，重新構建，以獲得與原天然病毒蛋白結構類(lèi)似，但又不同的新免疫刺激分子。在全世界，這一技術(shù)路線(xiàn)也只有第三軍醫大的吳玉章采用。該技術(shù)路線(xiàn)是以乙肝抗原表位圖譜為基礎，采用肽掃描技術(shù)、窗口分析技術(shù)和氨基酸殘基置換方法確定了HBV保護性抗原的B、Th、CTL細胞表位和表位內的必需氨基酸殘基；在此基礎上，按照不同類(lèi)型表位、不同抗原來(lái)源表位、不同的連接順序、不同的化學(xué)修飾基團等，采用EBVD方案進(jìn)行設計、篩選。表位組分的來(lái)源范圍包括：HBV的s抗原、e抗原、e抗原的線(xiàn)性?xún)?yōu)勢B細胞表位、T輔助細胞（Th）表位、細胞毒性T細胞（CTL）表位，來(lái)源于其他抗原的線(xiàn)性通用Th細胞表位、表位修飾基團。在表位修飾基團中考慮了可促進(jìn)免疫活性的單鏈脂肪酸和糖類(lèi)基團。
表位間的連接順序采用已證明對抗原性（免疫原性）無(wú)影響的-A-A-A-或-G-G-G-或-K-S-S-。采用分子模擬方法，比較了所設計抗原多肽的結構與天然抗原之間的相似性、與MHC結合的位阻情況等，并對抗原多肽進(jìn)行免疫原性、理化、生化特性分析，排序。3．治療用（合成肽）乙肝疫苗相關(guān)機理基礎治療用（合成肽）乙肝疫苗，通過(guò)基于表位疫苗設計路線(xiàn)（EBVD）方法，設計特異性主動(dòng)免疫治療藥物。來(lái)解決由于Th1/ Th2細胞極化的失衡導致Th1細胞、和CTL細胞的功能低下，不能夠清除有感染病毒的肝細胞，從而機體表現為持續感染狀態(tài)的免疫耐受問(wèn)題。Th1主要參與細胞毒性T（CTL）細胞介導的細胞免疫，解決胞內感染問(wèn)題中發(fā)揮重要作用。而Th2主要功能在于刺激B細胞增殖及嗜酸性粒細胞活化，促進(jìn)抗體(IgG1與IgE)產(chǎn)生，參與體液免疫，在抗細胞外感染與致敏原引起的免疫應答中起關(guān)鍵作用。越來(lái)越多的證據表明Th1/ Th2細胞極化是免疫應答調節中的關(guān)鍵環(huán)節。Th1/ Th2細胞極化異?；蛉毕菥梢詫е录膊?，如慢性感染、自身免疫性疾病或變態(tài)反應。所以Th1/ Th2細胞極化是目前免疫應答研究的熱點(diǎn)?，F已證實(shí)，Thl、Th2細胞是Th前體細胞(pTh)在特定抗原刺激及多種信號綜合作用下．發(fā)生功能性極化的結果。pTh指未受抗原刺激、處于原始狀態(tài)的細胞(也稱(chēng)為naive cel1)，在抗原刺激后分化為中間狀態(tài)的Th0細胞，在多種因素的綜合作用下．Th0選擇性地往Thl或Th2方向分化。究竟是何信號誘導Thl／Th2極化?這種極化的分子機制是什么?已成為免疫功能紊亂與免疫調節、移植免疫、感染及腫瘤免疫等研究領(lǐng)域中急待弄清的環(huán)節。已有的研究表明，細胞因子、抗原、抗原遞呈細胞(APC)、共刺激信號及一些基因調控因子均為T(mén)hl／Th2極化提供了重要信號。
Th細胞的功能性極化對于調節機體免疫功能是至關(guān)重要的。許多免疫性疾病與Th極化異常有關(guān)，如AIDS患者體內存在著(zhù)Thl向Th2應答的顯著(zhù)偏移，增強Thl應答能緩解病情；腫瘤細胞多分泌Th2型細胞因子使機體處于Th2優(yōu)勢應答狀態(tài)，這可能是腫瘤免疫逃逸機制之一。Th極化是一個(gè)多信號參與的復雜過(guò)程，弄清Th1／Th2極化的分子機制，對于在免疫功能紊亂狀態(tài)下誘導Th細胞極化平衡，針對不同的免疫性疾病誘導某種Th細胞的優(yōu)勢極化，以及發(fā)展特異性免疫治療等，具有指導意義。
我們認為理解Th1／Th2極化的分子機制與CTL的相關(guān)性是目前的治療性疫苗的核心。
殺傷性T細胞又稱(chēng)為細胞毒性T細胞(CTL、主要參與抗病毒、腫瘤免疫及移植排斥反應。靜止的CTL前體細胞通過(guò)其TCRαβ識別靶細胞或抗原提呈細胞表面的抗原肽一MHC l復臺物”、被活化為抗原特異性的細胞毒效應細胞，并通過(guò)顆粒外吐和受體介導的機制(如Fas／FasL途徑、TNF／TNFR途徑等)殺傷靶細胞。多年的研究表明，輔助性CD4+T細胞存在著(zhù)功能性極化反應，而該極化反應的平衡對誘導或抑制CTL的活化及功能有著(zhù)重要的調節作用。
機體維持正常的免疫功能狀態(tài)．有賴(lài)于細胞免疫與體液免疫間的平衡，該平衡在很大程度上受CD4+Th細胞功能性極化及CTL應答所控制。
Th1細胞與CTL活化許多實(shí)驗發(fā)現有效的CTL活的產(chǎn)生需要多步誘導及多種信號，并證實(shí)了給予Th細胞輔助比單個(gè)刺激分子更加有效：
CD4+Th細胞接受APC提呈的抗原信號后。其膜表面可大量表達CD154分子，CD154與APC細胞表面的CD40分子結合，可引起APc活化并分泌大量IL-I2，IL-12又可反過(guò)來(lái)作用于Th及CTL。表明Th1與CTL活化密切相關(guān)。
在某些病毒感染細胞及腫瘤細胞可表達Fas，而CTL及Th1細胞被抗原激活后可迅速高表達FasL，但Th2卻很少表達FasL，故CTL及Th1細胞可通過(guò)不依賴(lài)穿孔素的FasL途徑，使靶細胞死亡。CTL在抗病毒感染的免疫反應中占有重要地位。而CD4+輔助性T細胞亞群Th1、Th2的平衡在抵御病毒感染中起了同樣重要的作用。
HBV感染在大量乙型肝炎病毒感染的病例研究中．發(fā)現急性自限性肝炎與高效的CTL應答之間有著(zhù)密切聯(lián)系。但在慢性乙肝患者體內，CTL活性通常是較弱的，甚至缺乏。在慢性HBV感染中，肝浸潤性CD4+T細胞主要是Th0或Th2細胞；相反，在急性自限性肝炎中，肝浸潤性CD4+T細胞主要為T(mén)h1型細胞。表明以Th1為主的應答促進(jìn)細胞介導的免疫，與更好地控制病毒感染及延緩慢性疾病的發(fā)作有關(guān)。
慢性肝炎患者體內高水平的循環(huán)病毒抗原可能是產(chǎn)生CTL對抗原特異性耐受和Th1朝Th2轉換的原因之一。
治療用（合成肽）乙肝疫苗（從本質(zhì)上應該稱(chēng)為藥物）的核心就是要上調Th1細胞的活化數量和CTL細胞的功能。以期達到徹底清除肝細胞的目的。有關(guān)體液免疫方面，我們已經(jīng)取得了非常大的成功（在預防性疫苗上），但是作為治療用（合成肽）乙肝疫苗，在提高體液免疫反應的同時(shí)，更加注重細胞免疫，加強CTL效應。該疫苗在表位設計上，利用了HBcAg來(lái)源的CTL表位（21～30位氨基酸殘基）、破傷風(fēng)類(lèi)毒素來(lái)源的通用Th細胞表位（4～17位氨基酸殘基）、PreS2來(lái)源的B細胞表位（34～44位氨基酸殘基）和棕櫚酸分子(N末端)各一個(gè)拷貝。同時(shí)考慮了MHC限制位間的相對位置及其間隔順序等。體液免疫只能夠殺死血液里面游離的病毒顆粒，對于細胞內感染需要通過(guò)細胞免疫來(lái)解決。該疫苗主要通過(guò)細胞免疫中CTL細胞的CTL效應來(lái)清除胞內感染的細胞。
通過(guò)HBcAg來(lái)源的CTL表位（21～30位氨基酸殘基），激活細胞免疫中CTL細胞的CTL效應。同時(shí)PreS2來(lái)源的B細胞表位和破傷風(fēng)類(lèi)毒素來(lái)源的通用Th細胞表位，能夠有效的增強CTL效應。這里主要介紹CTL效應是如何識別和殺死帶病毒的肝細胞的。
1．CTL的免疫識別免疫識別是機體免疫系統產(chǎn)生特異性免疫的基礎，通過(guò)對抗原的特異性免疫識別．激發(fā)機體產(chǎn)生免疫應答最終由效應細胞和，或效應分子(Ab)清除病原體或異己物質(zhì)近年來(lái)，細胞毒性T細胞(CTL)引起人們的重視，發(fā)現人類(lèi)面臨的多種難以攻克的疾?。缒[瘤、AIDS、乙型肝炎等，CTL在疾病治愈中扮演著(zhù)關(guān)鍵角色。
CTL僅能識別表達于抗原提呈細胞(APCs)表面并與MHCⅠ類(lèi)分子結合成復合物的肽類(lèi)抗原。其它共刺激分子如CD3、CD8和輔助分子IFA-1、CD28等可分別與相應配體結合，提供CTL激活的共刺激信號．有助于T細胞對外來(lái)抗原的精確識別。
雖然抗原在A(yíng)PC中加工的分子事件并不完全清楚，但已有動(dòng)物實(shí)驗的證據表明：
可能傳統的MHCⅠ分子、MHC1ike分子、CD1等參與了交叉呈遞和交叉激活；分子伴娘(如熱休克蛋白)對于交叉呈遞和交叉激活至關(guān)重要；而抗原的特性起最關(guān)鍵的作用。既往由于“可溶性蛋白不能在體誘導CTL活性”，因此實(shí)現可溶性蛋白在體內誘導CTL活性一直難以突破。但在這些認識的啟發(fā)下通過(guò)抗原的設計對實(shí)現可溶性蛋白在體內誘導CTL活性取得重要突破。吳玉章提出了抗原工程(antigen engineering)的概念及模擬抗原(mimogen)、模擬病毒(mimovirus)的概念，采用APC靶向技術(shù)、MHCⅠ呈遞途徑靶向技術(shù)(proteasome靶向、endosome靶向、內質(zhì)網(wǎng)靶向等)可啟動(dòng)CTL應答，探索到顆?？乖?、分子內佐劑抗原可有效在體內誘導Th1極化和CTL應答。在此基礎上，建立了基于表位的治療性疫苗設計路線(xiàn)(epitope．based vaccine design，EBVD)，并篩選到了乙肝和腫瘤治療性疫苗的先導結構。
CTL抗原直接識別和活化機制吳玉章在實(shí)驗研究中發(fā)現一些經(jīng)特殊修飾(如：磷酸化、人工糖基化)的多肽抗原可直接活化CTL。T細胞作為非職業(yè)APC的意義目前并不清楚，但直接被抗原活化則具有重要的理論意義和應用價(jià)值。此種識別是由傳統MHCⅠ類(lèi)分子介導或是其它分子介導正在進(jìn)一步研究中。非職業(yè)APC表面的空(未結合表位)MHCⅠ類(lèi)分子、MHC-like分子的代謝動(dòng)力學(xué)及其意義是弄清這一問(wèn)題的前提。
CTL的效應機制CTIL的效應機制一般認為，CTL細胞毒作用主要依賴(lài)于穿孔素－顆粒酶途徑和FasL-Fas介導的細胞凋亡途徑。前者發(fā)生較早，約占細胞毒60％一70％權重，后者發(fā)生較晚，約占30％一40％權重。
不同細胞毒T淋巴細胞亞群的殺傷靶細胞機制略有不同CD8+ CTLs主要通過(guò)顆粒依賴(lài)性途徑殺傷靶細胞和病原，DN CTL(CD8- CD4-)主要是通過(guò)FasL-Fas介導且不能殺傷病原體；而CD4+CTLs可通過(guò)任一途徑殺傷靶細胞。
在細胞內感染CTL清除病原體的作用是否以犧牲宿主細胞功能為代價(jià)?最近國外兩家實(shí)驗室在乙型肝炎模型證實(shí)：乙肝抗原特異性CTL在清除病原的同時(shí)并不造成肝功能損害。吳玉章的實(shí)驗結果也證實(shí)了這一現象。有人推測疾病狀態(tài)下CTL造成肝功損害是由于病毒非特異性CTL所致。這提示CTL的效應機制及其在腫瘤和細胞內感染中的不同之處目前還不完全清楚。
相關(guān)機理基礎小結：從上面有關(guān)乙肝免疫耐受的機理、治療用（合成肽）乙肝疫苗有關(guān)的免疫識別理論（表位生物學(xué)、氨基酸密碼學(xué)說(shuō)），影響Th1/Th2細胞極化的多重因素，CTL效應與Th1/Th2細胞極化的關(guān)系，CTL免疫識別和效應，以及吳教授的基于表位的疫苗設計路線(xiàn)（EBVD）的闡述來(lái)看。我們認為該疫苗的設計路線(xiàn)新穎，理論成熟可靠，具有很高的實(shí)用價(jià)值。打破乙肝病毒免疫耐受的概率極大。
4．治療用（合成肽）乙肝疫苗相關(guān)實(shí)驗情況吳玉章采用Chou和Fasman方法預測adw，adr，ayw三種亞型的己肝病毒Pre-s2蛋白的二級結構，并用雙親性方案和親水性方案分析了抗原表位。結果顯示三者均可能含有較多的β-片層和β-轉折，N末端30個(gè)殘基所形成的二級結構較保守，而c末端順序的構象在亞型間差別較大，Th細胞識別的表位可能在39-49肽段，B細胞識別的袁位可能主要在l3一l8殘基或其附近，為分子免疫學(xué)的深入研究提供了線(xiàn)索。
吳玉章采用自己實(shí)驗室建立的短肽點(diǎn)免疫結合試驗確定了Pre-S2蛋白B細胞表位的精細特異性．這對設計新一代疫苗及診斷試劑有指導意義。
在對PreS蛋白進(jìn)行了高分辨率免疫識別研究基礎上，以PreS蛋白的優(yōu)勢B細胞表位B1、B2為基礎，引入不同的Th細胞表位Thl、Th2以觀(guān)察不同表位組合與搭配對免疫原性的影響；設計、合成四分枝MAP肽并與線(xiàn)性多肽PreS2蛋白相比較，觀(guān)察分枝肽設計對免疫原性的影響。結果顯示此種MAP多肽均比PreS2誘發(fā)更高抗體滴度；Th細胞表位引入可顯著(zhù)增強反應強度。增加肽抗原結構復雜性可提高其免疫原性，其表位排列以B細胞表位在賴(lài)氨酸核心外側為佳，MAP是一種較好的肽苗結構。
吳玉章在實(shí)驗中發(fā)現，MAP肽誘發(fā)的免疫反應明顯高于對照的線(xiàn)性Pre-S2蛋白和Pc，證明MAP肽的結構能明顯提高抗原肽的免疫原性，提示分枝肽結構可能部分恢復其大分子特征。在MAP肽抗原表位經(jīng)重新搭配、組合，表位分子內環(huán)境已不同于原來(lái)的天然蛋白，在恢復其大分子特性后，提高了其免疫原性。雖然表位氨基酸序列末變，但其構象是如何變化，抗原進(jìn)入體內到淋巴細胞和活化需經(jīng)過(guò)抗原被吞噬、降解、呈遞多個(gè)復雜的環(huán)節。在體內激發(fā)的抗體是否還能識別原來(lái)的天然蛋白抗原?該研究以Pre-S蛋白為包被抗原，檢測不同免疫原激發(fā)的抗體與Pre-S的交叉反應，研究發(fā)現MAP1和MAP2產(chǎn)生抗體都能和Pres蛋白結合，說(shuō)明含有Pre-S蛋白B細胞表位的MAP肽所激發(fā)的抗體仍能識別Pre-S蛋白，因此，該抗原的免疫特異性是由特異性氮基酸序列決定MAP結構的引人是替代傳統肽交聯(lián)蛋白載體并提高免疫原性的有效辦法。
構建有效的新型抗原肽，必須研究T、B細胞表位的不同組合，研究引入了兩個(gè)能夠協(xié)助HBsAg特異性B細胞產(chǎn)生抗體的Th細胞表位，連結于MAP肽的核心端。研究發(fā)現MAP1、MAP2及Pre-S蛋白都能刺激特異性淋巴細胞發(fā)生增殖，且相互之間沒(méi)有交叉刺激作用。說(shuō)明活化的淋巴細胞亞群為抗原特異性的。既往研究表明：僅采用單一B細胞表位的構建MAP肽，其免疫原性仍不夠理想。PreS蛋白能刺激免、小鼠T細胞的活化，Pre-S蛋白產(chǎn)生抗體滴度明顯高于對照的Pc。而Pc有能被小鼠MHC分子識別的T細胞表位，可能與在小鼠誘發(fā)的抗體滴度稍高于對照免疫有關(guān)。以上實(shí)驗說(shuō)明，引入Th細胞表位能增強抗原肽的免疫原性。值得一提的是，MAP1對小鼠淋巴細胞ST的增殖作用明顯高于其它抗原(P<0．05)。但MAP1誘發(fā)的抗體滴度并非最高，而低于MAP2，是否抗體產(chǎn)生主要決定因素在于B細胞表位的免疫原性? Th細胞的活化在抗體產(chǎn)生的定量如何，尚需進(jìn)一步研究。
在構建完P(guān)re-S蛋白B細胞的基礎上，利用已研究的HBcAg中CTL表位，破傷風(fēng)類(lèi)毒素通用的Th細胞表位，以及分子內脂類(lèi)佐劑為設計基礎。設計了新一代的疫苗。
相關(guān)的試驗情況如下：
治療用HBV模擬抗原的設計及其誘導慢性乙型肝炎患者外周血CTL活性研究論文中。
首先，是通過(guò)引入四聚體技術(shù)，比較基于不同表位組合的模擬抗原分子的免疫原性，研究其結構與誘導免疫應答之間的關(guān)系。以乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18—27表位為基礎，分別引入了Th、Th+B細胞表位，合成了3種模擬抗原，并以這3種模擬抗原在體外刺激慢性乙型肝炎患者的外周血單個(gè)核細胞為模型，通過(guò)HLA-A2*0201 tetramer定量檢測抗原特異性細胞毒性T細胞(CTL)。在研究中以血清HBsAg、anti-HBc、anti-HBe陽(yáng)性、血清谷氨酸丙酮酸轉氨酶(肝臟炎癥的衡量指標)、HBV DNA水平低、HLA-A2+的慢性乙型肝炎患者為研究對象是基于此類(lèi)患者外周血中存在的CD8+T細胞特異性地識別病毒后能夠有效的增殖以控制病毒復制。因此選取此類(lèi)患者用于所設計的模擬抗原能有效地誘導產(chǎn)生特異性CTL反應的研究。
結果顯示3種模擬抗原分子能有效地誘導慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細胞產(chǎn)生抗原特異性CTL反應；Th和B細胞表位的引入可增強該效應。所建立的四聚體技術(shù)可定量檢測表位特異性CTL；模擬抗原的設計中引入Th、B細胞表位可增強其免疫原性。
血清中和抗體的檢測多肽Pl和P2不能誘導小鼠產(chǎn)生中和抗體，多肽P3 JJlJ強免疫4次后，可產(chǎn)生適度的中和抗體，其滴度約為1：670對照肽組未檢測到抗體產(chǎn)生。
模擬抗原誘導T細胞Th1／Th2型極化的分析用雙抗體夾心EL1SA法檢測小鼠免疫血清中細胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ等細胞因子譜的分泌量變化，間接分析T細胞極化情況。結果表明，P3誘導Thl、Th2型細胞極化的能力均較強，并以Thl型極化為主；多肽Pl、P2及Mart-1 27-35均能誘導較弱的Thl型T細胞極化。各模擬肽抗原結果差異顯著(zhù)(P<0.05)．6．疫苗項目總結目前，無(wú)論是蛋白疫苗、DNA疫苗還是多肽類(lèi)疫苗，國內外現有研究開(kāi)發(fā)，主要集中在天然抗原選擇搭配、在預防性疫苗的制劑中添加抗原或抗體的方式。而且除多肽類(lèi)疫苗是在表位識別水平外，其余的都是在蛋白大分子水平上。目前所有的治療性乙肝疫苗沒(méi)有出現有效治愈的案例，沒(méi)有取得突破性的進(jìn)展。在天然抗原的組合和搭配上進(jìn)行了多年的探索，依然是沒(méi)有取得突破性的近展。主要是由于天然抗原產(chǎn)生的免疫耐受、免疫偏差、免疫顛覆基本上是同時(shí)存在，因此僅僅依靠天然抗原的組合難以解決乙肝病人的免疫耐受。隨著(zhù)模擬表位的發(fā)現，吳玉章在乙肝疫苗的設計中提出了模擬抗原代替天然抗原的思路，首創(chuàng )了表位識別的氨基酸密碼學(xué)說(shuō)和模擬抗原的分子設計理念，來(lái)克服天然抗原的免疫弱勢和蛋白大分子的免疫偏差和免疫顛覆。
從有關(guān)乙肝免疫耐受的機理、治療用（合成肽）乙肝疫苗有關(guān)的免疫識別理論（表位生物學(xué)、氨基酸密碼學(xué)說(shuō)），影響Th1/Th2細胞極化的多重因素，CTL效應與Th1/Th2細胞極化的關(guān)系，CTL免疫識別和效應，以及吳教授的基于表位的疫苗設計路線(xiàn)（EBVD）的闡述來(lái)看。我們認為該疫苗的設計路線(xiàn)新穎，理論成熟可靠，具有很高的實(shí)用價(jià)值。打破乙肝病毒免疫耐受的概率極大。
從臨床前的實(shí)驗資料可以看出，吳玉章有關(guān)乙肝疫苗的相關(guān)研究進(jìn)程，是一個(gè)層層遞進(jìn)的關(guān)系，目前公開(kāi)資料中，顯示該疫苗到動(dòng)物試驗結束之前，都是非常不錯的效果，從中，我們也能夠看到該疫苗的理論基礎和設計方法在實(shí)踐中獲得了驗證。根據吳教授公開(kāi)的實(shí)驗數據和相關(guān)免疫指標的檢測，以及在動(dòng)物試驗中的良好結果，我們認為非常有可能在人體內出現一個(gè)特異性的免疫應答，從而達到打破免疫耐受和徹底治愈乙肝的目標。
治療用（合成肽）乙肝疫苗相關(guān)技術(shù)的核心是基于表位生物學(xué)和氨基酸密碼學(xué)說(shuō)，通過(guò)特異性免疫，糾正免疫偏差、免疫顛覆、激發(fā)免疫效應，達到特異性免疫治療的目的。所以該項目的相關(guān)技術(shù)能夠應用的領(lǐng)域包括慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、認知性疾病等。
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