• 核酸檢測法

核酸檢測的物質(zhì)是病毒的核酸。核酸檢測是查找患者的呼吸道標本、血液或糞便中是否存在外來(lái)入侵的病毒的核酸，來(lái)確定是否被新冠病毒感染。因此一旦檢測為核酸“陽(yáng)性”，即可證明患者體內有病毒存在 。

新冠病毒感染人體之后，首先會(huì )在呼吸道系統中進(jìn)行繁殖，因此可以通過(guò)檢測痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判斷人體是否感染病毒。  所以說(shuō)，核酸檢測陽(yáng)性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標準。 

核酸檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現后，我國科學(xué)家在極短的時(shí)間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析，并通過(guò)與其它物種的基因組序列對比，發(fā)現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實(shí)驗室檢測過(guò)程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染。 

新型冠狀病毒核酸檢測原理

檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見(jiàn)的是熒光定量PCR（聚合酶鏈式反應）。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，包含一對特異性引物以及一個(gè)Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；如反應體系存在靶序列，PCR反應時(shí)探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發(fā)出熒光。每擴增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環(huán)數（Ct值）與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高， Ct值越小。不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品會(huì )依據自身產(chǎn)品的性能確定本產(chǎn)品的陽(yáng)性判斷值。 

新型冠狀病毒的核酸檢測流程

對于新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說(shuō)明書(shū)”樣本要求“部分進(jìn)行樣本采集，常規的樣本類(lèi)型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本后，需盡快進(jìn)行檢測，如無(wú)法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行低溫封裝，并送到專(zhuān)門(mén)的檢測機構進(jìn)行檢測。檢測機構收到樣本后，對樣本進(jìn)行核酸提取，核酸提取試劑應使用批準產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進(jìn)行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中指定的熒光定量PCR儀，通過(guò)熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

上述過(guò)程中樣本的采集、保存、轉運，樣本核酸的提取和檢測、結果的判讀均須嚴格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。 

核酸檢測的“假陽(yáng)性”與“假陰性”

核酸檢測的“假陽(yáng)性”是指患者本來(lái)沒(méi)感染新冠病毒，但核酸檢測出現陽(yáng)性結果。此“假陽(yáng)性”的出現通常是由于實(shí)驗室檢測過(guò)程中標本間的交叉污染或實(shí)驗室核酸污染造成的。在技術(shù)層面上講，只要實(shí)驗室嚴格落實(shí)質(zhì)控工作，可有效避免“假陽(yáng)性”的產(chǎn)生。

核酸檢測的“假陰性”是指從患者的臨床癥狀、肺部影像學(xué)結果甚至流行病學(xué)史都支持為新冠肺炎，但患者病毒核酸檢測結果為“陰性”，檢測結果與臨床不符。

通?！凹訇幮浴碑a(chǎn)生原因為：

（1）病毒入侵人體初期，人體內病毒量尚未達到可檢測的程度。在病毒潛伏期、輕度癥狀、嚴重癥狀的不同時(shí)期，人體的不同部位（如鼻咽部、口咽部、氣管、支氣管和肺泡）的病毒載量會(huì )存在差異。所以，采樣時(shí)機和采樣部位的不同，可能導致所采集的標本中沒(méi)有足夠量的病毒；

（2）任何檢測試劑都有其檢測下限（即敏感性），如果患者標本內的病毒達不到所使用試劑的檢測下限，則會(huì )出現假陰性；

（3）實(shí)驗室儀器設備性能和人員檢測能力差、質(zhì)量管理落實(shí)不到位等也會(huì )產(chǎn)生“假陰性”；

（4）采樣不規范、采集部位不當、采集標本不典型，導致標本中被病毒感染的細胞太少或沒(méi)有。即可能造成“假陰性”。